新城疫并发大肠杆菌病的病例在临床上很常见，在秋冬季节尤其是在通风不良等情况下更容易发生，该病例主要以呼吸道、腹泻为主要症状。
一、流行病学调查及临床诊断
某规模鸡场发生鸡只采食下降，精神萎靡，拉稀，严重呼吸道等症状，发病及死亡率较高。通过流行病学调查，了解鸡群的饲养、免疫、发病等情况。挑取濒死或刚死亡鸡，观察外部特征，剖检观察各器官病变。
该鸡群6500只，86日龄，塑料大棚笼养。5日龄新支二联苗点眼，12天注射新支流三联灭活苗，同时新城疫活苗点眼，15日龄法氏囊炎疫苗饮水，30日龄注射新流二联灭活苗，40日龄新支二联苗饮水。50日龄时发现有呼吸道症状，使用泰乐菌素3天，未发现症状有好转；55日龄发现鸡群精神萎靡，食欲减退，消瘦，拉黄绿粪便，呼吸道症状加重，死亡十几只。剖检后发现，腺胃乳头水肿，个别有出血，气管环出血，肠道出血，个别鸡十二指肠有枣核样溃疡灶，盲肠扁桃体出血，心包炎、气囊炎。
二、实验室诊断
1、细菌分离及药敏实验
细菌培养：无菌取家禽的肝、脾组织，用接种环蘸取肝、脾组织在普通营养琼脂和麦康凯琼脂上接种，37℃培养18-24小时，观察结果，从其中挑取可疑菌落，进行革兰氏染色，镜检，观察菌体形态及染色特征。
细菌纯培养及生化实验：从麦康凯琼脂上挑取红色、圆形隆起、光滑的菌落在麦康凯琼脂上划线，37℃培养18-24小时，观察结果，再次染色、镜检。无菌挑取纯培养后的单个菌落，分别接种葡萄醣、乳糖、麦芽糖、蔗糖、硫化氢、甘露醇、肌甘、水杨苷、尿素发酵管，倒置放置，37℃培养18-24小时后，观察结果。
药敏实验：将纯培养的到的细菌接种液体培养基，取菌液均匀涂布营养琼脂，贴上药敏纸片，观察测量抑菌圈大小。
2、病毒分离鉴定
病料采集处理：无菌采集病鸡的肝、脑、脾、肾等器官，放于灭菌平皿中剪碎，用含抗生素的PBS（含2000U/ml青霉素、2mg/ml链霉素、50μg/ml庆大霉素和1000U/ml制霉菌素，用10M NaOH,调pH值至7.0～7.4）按1：5比例对组织样品进行匀浆，转移至灭菌指形管中， 5000rpm，离心10min，将上清转入新的灭菌指形管中准备进行病毒分离接种。
病毒的分离：取10日龄发育良好的SPF鸡胚通过尿囊腔途径进行鸡胚接种，接种量为0.2ml，每个样品接种3只胚，接种后置35℃继续孵化。在接种后的18-24h左右开始照胚，若鸡胚在24h内死亡则弃去不用,以后每隔12h照胚1次，死亡鸡胚置4℃冰箱冷藏4～6 h以收缩血管无菌收集鸡胚尿囊液。
病毒鉴定：对收获的鸡胚尿囊液进行血凝试验。用有血凝性的鸡胚尿囊液进一步用新城疫和H9禽流感阳性血清和H5阳性血清进行HI试验，以鉴定病毒类型。
血清抗体的测定：整群随机抽取10只鸡血2ml，分离血清，测定ND、H9、H5的抗体水平。
3、诊断及实验结果
细菌在营养琼脂上形成圆形凸起、光滑、湿润的灰白色菌落，在麦康凯琼脂上生长成粉红色，圆形隆起、光滑湿润，边缘整齐的菌落。单个菌落涂片，革兰氏染色镜检可见革兰氏阴性、两端钝圆、中等大小短直杆菌或球杆菌，多单个，偶见成双存在，无荚膜，无芽孢。
细菌能发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖产酸产气，部分可以分解蔗糖产酸，几乎所有的菌株可以发酵甘露醇产酸产气，所有菌株均不能发酵肌醇硫化氢和卫矛醇，符合大肠杆菌的生化特征。
在生化培养箱经12小时观察结果发现细菌对氟苯尼考、盐酸多西环素敏感，对其他几种抗生素均不敏感。
样品处理后接种鸡胚后所有鸡胚在48小时内死亡，收获的鸡胚尿囊液进行HA试验，尿囊液具有血凝性；将尿囊液用新城疫和H9禽流感阳性血清和H5阳性血清进行HI试验，发现尿囊液能被ND阳性血清抑制而不能被H9和H5阳性血清抑制。
新城疫抗体水平参差不齐，个别偏高，结果见表1。
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血清编号 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
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ND抗体水平(log2) |
5 |
10 |
6 |
6 |
5 |
9 |
6 |
5 |
7 |
6 |
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H9抗体水平(log2) |
6 |
5 |
6 |
7 |
6 |
5 |
7 |
6 |
7 |
6 |
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H5抗体水平(log2) |
6 |
5 |
7 |
7 |
6 |
5 |
6 |
7 |
7 |
7 |
4、治疗
根据实验结果，针对鸡场情况，建议将病死鸡进行无害化处理，对环境进行消毒，对未发病鸡用Ⅳ系苗4倍量肌肉注射，用10%的氟苯尼考粉饮水，连用四天。一周后电话回访，用药3天后死亡逐渐减少，5天后基本没有死亡现象，病情得到控制。
三、 小结和讨论
1、新城疫病毒主要通过鸡的呼吸道和消化道传播，发病后机体也主要表现为呼吸道、消化道及神经症状。新城疫的流行特点、症状及病理变化与某些疾病相似，诊断时要进行鉴别诊断，特别是与禽流感进行区别，常用的方法就是病毒分离和血凝、血凝抑制试验。在新城疫免疫时，要综合考虑到母源抗体、疫苗毒力、鸡群状况及抗体水平等因素，定期检测抗体，再选择最佳用苗时机。
2、大肠杆菌一般临床上主要表现为“三炎”症状，在诊断上困难不大，但由于抗生素药物的广泛应用，细菌的耐药性增大，最好通过药敏试验选择药物进行治疗，在饲养过程中要尽量减少抗生素药物使用和不必要的预防用药。
3、新城疫并发大肠杆菌的病例在临床上很常见，在秋冬季节尤其严重，在缺乏抗体有效保护的情况下，特别是在通风不良、养殖密度过高等情况下更容易发生且传播速度更快。现在规模化鸡场都比较重视新城疫的免疫，定期都进行活苗和灭活苗的接种，典型的新城疫症状发生很少，基本都是呈现非典型症状，但在发病初期如得不到重视，继发感染大肠杆菌、巴氏杆菌等其他疾病，也会对养殖带来巨大损失。
陈连颐 中国农业科学院家禽研究所
崔荣华 江苏省东台市动物卫生监督所