原创 北京中科 肖银霞 中科基因资讯
牛结节性皮肤病（lumpy skin disease，LSD）又称牛疙瘩皮肤病或牛结节疹，是由痘病毒属的结节性皮肤病病毒引起，以发热、淋巴结肿大、皮肤广泛性结节和溃疡性病变为主要特征，发病率在5%～45%，病死率达10%。该病可引起牛体重增长缓慢、产奶量降低、不孕或不育、皮革损害等，对养殖场造成了巨大的经济损失。
1、 疾病发生
该病起初是在1929年赞比亚北部发现，当时并不清楚疾病的病因。随后，1943年10月，贝专纳保护国（博茨瓦纳）也发生了一起类似的疫情，此次仍然没有对该病进行描述。直到1945年，南罗得西亚（southern Rhodesia）和南非发生此病，被Thomas and Maré命名为疙瘩状皮肤病。1957年该病在东非的肯尼亚被诊断为结节性皮肤病，Alexander 等 （1957）首次从组织中分离出感染的病毒。随后多个国家和地区出现了此病的报道，我国是在2019年8月首次在*疆新**伊犁哈萨克自治州确诊发生牛结节性皮肤病，此次统计发病比例为17.0%～36.2%，病死比例为0.8%。LSD的发生具有明显的季节性，常见于吸血节肢动物利于繁殖的春、夏、秋季节。Yeruham等（1995）研究认为牛结节性皮肤病是由昆虫媒介或运输车辆携带病毒传播，另外被病毒污染的食物、共用水槽或者被血液污染的针头等也可能是此病传播的途径。所有品种和年龄的牛均易感，小牛易感性更高。
2、 病原
LSD的病原是牛结节性皮肤病病毒（lumpy skin disease virus，LSDV）。LSDV是一种痘病毒，其形态和抗原与牛痘病毒差异很大，而与绵羊痘病毒（sheep pox virus，SPPV）和山羊痘病毒（goat pox virus，GPV）相似，同属于山羊痘病毒属。LSDV是双链DNA含有囊膜的病毒，在pH 6.6-8.6之间稳定；在冬季和干燥情况下，该病毒在环境中存活能力很强。此病毒容易被洗涤剂十二烷基硫酸钠灭活，并且对氯仿和*醚乙**敏感。虽然很多消毒剂能够杀灭该病毒，但这些消毒剂往往难以杀灭发病动物脱落的痘疹痂皮中的病毒。在感染该病的病牛中，病毒主要存在于皮肤结节、皮损痂、血液、唾液、鼻分泌物、精液和牛奶中（Weiss, 1968年）。LSDV不感染人类。
3、 临床诊断
3.1 临床症状
自然感染LSD病例，潜伏期2～4周，而实验感染病例潜伏期4～14 d。动物感染后出现持续性发热表现，同时伴随着精神沉郁、食欲不振、流涎、流泪，以及黏液性或脓性鼻液，浅表淋巴结肿大。动物发烧2 d内，皮肤可能会出现结节状病变，有的病例只表现几个结节，有的病例却全身覆盖，多发生在头、颈、会阴、生殖器、乳房和四肢等部位，结节直径在5～50 mm，边界分明，坚固，呈圆形，隆起，累及皮肤、皮下组织，有时甚至累及皮下肌肉。结节可能会发生破溃，继发感染，也可能持续性存在。
一些急性感染的病例可能会在身体的腹侧部分，如胸部、四肢、乳房、阴囊和外阴等发生严重的皮下水肿。水肿的皮肤可能会坏死脱落，发生溃疡，并可能继发细菌感染。有的乳房水肿和坏死性病变，从而导致乳腺炎。公牛通常会暂时不育，但如果伴有严重的*丸睾**炎，可能会永久性不育。还有些病例的气管和肺部出现坏死病变，导致肺炎的发生。
皮肤结节疹
溃疡
3.2 病理变化
患畜口、鼻孔、口腔粘膜、消化道和呼吸道、外阴和包皮上可能出现软而黄灰色结节或溃疡性病变。急性病例出现四肢和腹部皮下水肿和全身淋巴结肿大。皮肤结节的切面呈灰白色，质地坚实。最终，皮肤结节中央可能坏死、脱落，形成颗粒状溃疡。此外，还可能发生血管炎、血栓、淋巴管炎、坏死和梗死。坏死区域被中性粒细胞、巨噬细胞和嗜酸性粒细胞浸润，后来被淋巴细胞、浆细胞、巨噬细胞和成纤维细胞所取代。胞浆内嗜酸性包涵体主要见于皮肤中的巨噬细胞、内皮细胞、周细胞和角化细胞，但也见于与毛囊相关的上皮细胞、皮肤腺体和平滑肌细胞。
本病根据临床症状可进行初步诊断，但临床上假性块状皮肤病（由牛疱疹病毒引起）、昆虫叮咬、蠕形螨感染、盘尾丝虫病、贝*诺斯**原虫病和嗜皮菌病等易与LSD混淆，因此确诊还需通过实验室检测诊断。
4、 检测诊断标准
4.2 实验室检测方法
4.2.1 电镜观察法
取新鲜的皮肤结节，制备组织悬液，用投射电镜观察。山羊痘病毒粒子如砖状，周围覆盖有短管状结构，大小约为（290×270）nm，有些病毒粒子周围有宿主细胞膜包围。实际上，山羊痘病毒很难与正痘病毒区别，且其形态学上与牛痘和痘病毒没有区别，但牛很少发生痘病毒和牛痘病毒感染，也不引起全身性感染，其他正痘病毒则均不引起牛发病。而副痘病毒在电镜下其形态小于痘病毒，呈卵圆形，外面有单个连续管状结构，像沟槽覆盖在病毒粒子周围，能与牛型山羊痘病毒区分开来。
4.2.2 病原学检测
进行病毒分离，可采集血液或组织。采集出现全身病灶4 d内牛的抗凝血，离心取上清液中含病毒的血沉棕黄层；或采集出现临床症状一周内的皮肤结节、肺病灶、淋巴结及病灶周围组织，制成匀浆液，分别接种于羔羊*丸睾**细胞（LT细胞）培养。连续14 d观察细胞病变（CPE）。CPE特征是细胞膜皱缩到细胞圆缩，核染色体边缘化。最初看到小面积的CPE，4～6 d波及整个细胞层。14 d后如未发现CPE，培养物应该冻融3次，取上清液接种新鲜的LT细胞并做二次培养。如出现CPE征兆，则进行特异性鉴定。即取培养物用*酮丙**进行固定，HE染色。由于山羊痘病毒在细胞内产生特异性的CPE和胞浆内包涵体，所以当看到相当于细胞核的一半、大小不一、且周边有清晰晕的呈亮红色嗜酸性细胞浆内包涵体，即可诊断为痘病毒感染。
4.2.3 血清学检测
采集患牛血液制备血清，以LSD阳性血清和阴性血清作对照，进行血清中和实验。中和滴度大于等于1:5为阳性，小于1:5为阴性，具体操作可参照SN/T 2515-2010 牛结节疹检疫技术规范。
4.2.4 聚合酶链反应
聚合酶链反应（PCR）是一种快速、灵敏的检测血液、皮肤和精液中病毒DNA的方法。LSD的荧光定量PCR检测方法。以LSDV国际标准毒株基因序列，设计特异性引物，F：5’-TTGTCAGAAACGAGG-3’，R：5’-ATGCCTCACTTGTATTTGG-3’和一条 MGB 探针[（FAM）5’-TCTTGCTAAAATACCA-3’（MGB）]。取皮肤、肺、脾脏、淋巴结或肌肉等组织样品，或血液进行核酸提取。以牛结节皮肤病病毒DNA做阳性对照，以不含LSDV的牛肉组织或原代*丸睾**细胞DNA做阴性对照，以水作空白对照，进行荧光定量PCR反应。
结果判定：Ct 值小于等于35，而且出现明显的扩增曲线，判定样品中存在LSDV核酸，无特异性扩增曲线或Ct值大于40，判定样品中无LSDV核酸，而35.0＜Ct值≤40.0的样本重做，重做结果无Ct值且无明显扩增曲线则为阴性，而有Ct 值且有明显扩增曲线则为阳性。
主要参考文献：
1. Eeva S.M. Tuppurainen. The detection of lumpy skin disease virus in samples of experimentally infected cattle using different diagnostic techniques. University of Pretoria etd, 2005.
2. SN/T 2515-2010 牛结节疹检疫技术规范
3. SN/T 5197-2019 牛结节疹病毒荧光定量PCR操作规程