石斑鱼(Epinephelussp.)隶属鲈形目(Perciformes)、鮨科(Serranidae),我国已有记录的石斑鱼共45种,广泛分布于热带和亚热带海域。
目前我国养殖的石斑鱼种类主要有:斜带石斑鱼(青斑)、赤点石斑鱼(红斑)、棕点石斑鱼(老虎斑)、鞍带石斑鱼(龙趸)、云纹石斑鱼(油斑)、及鳃棘鲈东星斑)和驼背鲈(老鼠斑)等。

虎龙杂交斑是由棕点石斑鱼和鞍带石斑鱼)杂交的新品种,具有生长速度快、成活率高、体形美观、肉质鲜美等优良特性。
虎龙杂交斑肉质鲜美,营养丰富,是一种高蛋白、低脂肪的上佳食用鱼。
虎龙杂交斑因其较快的生长速度,有效的饲料转化和极高的市场价值,使其在中国南方沿海养殖普遍。
可是,由于集约化、规模化养殖面积的扩大和养殖密度的增加,养殖石斑鱼的各种病害发生更加频繁,给养殖业带来了巨大的经济损失。

病害已成为制约水产养殖发展的主要因素之一,目前主要使用抗生素类及各类化学药品进行疾病防治。
大多数药物在使用过程中都存在过量使用,不仅使病原菌产生了耐药性和抗药性,而且化学物质在鱼体内的富集不利于食用健康,污染水体,造成整个水体生态环境的破坏。
实行健康养殖是当前及今后石斑鱼养殖业进一步发展的必然选择 ,而开发安全、环保、高效的饲料添加剂,提高石斑鱼免疫抗病力,降低石斑鱼养殖对药物的依赖,是实现石斑鱼养殖业可持续发展的重要技术支撑。

中草药的有效成分
现代中药化学研究结果表明,中草药的有效成分主要包括多糖、生物碱、甙类、挥发油、有机酸等多种常量与微量元素。
其中大部分与免疫功能密切相关。生物碱:生物碱为碱性含氮有机化合物,由不同的氨基酸或其直接衍生物合成而来,多数含杂环结构。
多糖:是由许多单糖以苷键结合而成的高分子碳水化合物,具有明显的免疫刺激作用,能够刺激巨噬细胞和T淋巴细胞的分泌、促进干扰素的诱生。

庞素风等发现云芝多糖,可以增强鱼体的非特异性免疫能力;有机酸:中草药中含有大量有机酸(除氨基酸外),多数有机酸与生物碱及钙、钠、钾、镁等金属离子结合以盐的形式存在,少数以游离形式存在。
挥发油:一般有香味的中草药都含有挥发油,如大蒜、薄荷、当归、等。
这类物质是一类复杂的混合物,具有芳香气味,常温下即能挥发,芳香族化合物具有明显的抗菌、抗病毒作用。
甙类:皂甙是由皂甙元、糖醛酸和糖组成的一类复杂的类化合物,由于其水溶液易产生肥皂样泡沫,故称之为皂甙。 很多中药都含有甙类有效成分,具有提高免疫功能的作用。

中草药在水产养殖中的应用
中草药不仅可以提供营养物质和能量,也可以预防疾病保证动物的健康。主要通过提高非特异性免疫,特异性免疫功能,促进机体免疫器官发育。增加溶菌酶的活性来增强机体抗病和防病能力。
顾雪飞等发现中草药可以提高鲤血清和免疫器官中的溶菌酶活性。Chen等在研究中发现黄芩与黄芪的黄苓甙与黄芪多糖能显著地提高鲤鱼、罗非鱼的非特异免疫功能。促生长作用:中草药含有多种营养成分和生物活性物质,作为饵料添加剂,有补充营养、促进生长的作用。

某些营养类中草药对发育不良和生长缓慢的鱼苗有改善作用。抗菌作用:大多数清热解毒类中草药含有生物碱、黄酮及香豆精等有效成分,能抑制或杀灭多种病原微生物。
刘修英等证实了中草药对烂鳃病、细菌性肠炎病等有抑菌效果。黄艳华等证实了五倍子、黄连、子的水提物和醇提物的对嗜水气单胞菌有较好抑制效果·。
刘红柏等发现中草药可改变肠道细菌丰度,增加有益菌类,抑制致病菌的生长。肉品改良作用: 曲木等用复方中草药投喂黄颡鱼发现其肌肉品质得到明显改善。

罗庆华等研究报道在鲤鱼饲料中添加杜仲叶粉,可以使鲤鱼肌肉肌纤维变细、改善肌肉品质。诱食作用:同其它动物一样,水产动物对饵料的色、香、味等存在感官上的要求,可促进诱食,提高饵料系数。
某些具有特殊的芳香味,有促进食欲和消食等作用如八角、茴香、鱼腥草和旱墨莲等对鱼类有明显的诱食作用。
马鞭草和鹿衔草的水提取及其活性成分含量测定
马鞭草提取工艺:将药草粉碎过15mm孔隙筛网,加入12倍溶剂量水,浸泡1h后,加热提取1.5h(以药材微沸开始计时),滤液趁热过300目滤布,药渣加8倍溶剂量水再加热提取1h,过300目滤布,合并2次滤液;记录提取液室温*体下**积V1,提取液浓缩至适量,记录浓缩液室温*体下**积V2,分别取V1、V2适量体积4℃保存备用。

将冷冻的石斑鱼解冻,称重后绞碎,置于大平皿中,放入恒温干燥箱中70℃烘干,烘干后再次称重,用微型粉碎机粉碎,粉碎后的样品暴露于空气中48h,得到鱼体风干样品,装入自封袋内,于20℃冷冻保存,待测。
血清中测定的抗氧化与免疫指标包括总抗氧化能力(totalantioxidantcapacity,T-AOC)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和溶菌酶(lysozyme,LZM),采用南京建成生物工程研究所试剂盒进行测定。

胰蛋白酶测定原理及定义:胰蛋白酶(trypsin)能催化水解底物精氨酸乙酯的酯链,使其在253nm处吸光度值升高,根据吸光度的变化可以计算出酶的活力。
在pH8.0,37℃条件下,每毫克蛋白中含有的胰蛋白酶每分钟使吸光度变化0.003即为一个酶活力单位。

每毫克组织蛋白37℃每分钟分解蛋白生成1μg氨基酸相当于1个酶活力单位。
组织中每毫克蛋白在37℃与底物作用30分钟,水解10mg淀粉定义为1个淀粉酶活力单位。
在37℃条件下,每克组织蛋白在本反应体系中与底物反应一分钟,每消耗1μmol底物为一个酶活力单位。

在测定肝胰脏消化酶之前,先将肝胰脏制成10%和20%的组织匀浆,10%的组织匀浆用于测定胰蛋白酶、胃蛋白酶和淀粉酶活力,20%的匀浆用于测定脂肪酶活力。
同时在测定酶活之前,还需测定样品中的蛋白含量。所有酶活以及总蛋白的测定按照南京建成生物工程研究所试剂盒步骤和方法进行测定。
结论
肠道微生物可以影响虎龙杂交斑能量摄入,帮助虎龙杂交斑获得营养物质,分解食物产生宿主不能合成的维生素和氨基酸,产生消化酶等,虎龙杂交斑肠道微生物具有合成不同的维生素和氦基酸的能力,并可分泌一系列酶,参与宿主对营养物质的消化过程。

在对虎龙杂交斑末端肠道微生物类群的研究发现,其具有代谢相关的功能,主要是参与糖、蛋白质和氨基酸代谢,在虎龙杂交斑对日粮代谢中起着重要作用。
热休克蛋白(Heatshockprotein,HSP)是细胞或生物体在各种不利条件(包括缺氧、盐度、重金属、自由基、病毒感染)刺激下产生的与抗逆性相关的一类应激蛋白。
根据分子量和等电点的不同,划分为七大家族小HSP、HSP40、HSP60、HSP70、HSP90、HSP110和泛素。
在免疫过程中,热休克蛋白可以作为佐剂、抗原、抗原载体,能提高专一性免疫效果。TRIF(TRdomain-containingmolecule1)是一种包含TIR结构域且诱导β干扰素的Toll样/(白细胞介素1)衔接蛋白,联接的信号通路被称为(TRIF)依赖途径。

干扰素由单核吞噬细胞高度分裂分化之后的巨噬细胞产生,通过干扰外来刺激物在体内的分裂分化和结合过程,进而发挥免疫调节作用。
鱼类中,TRIF基因已经在蓝鲶、斑马鱼、草鱼等中被克隆及鉴定,且研究结果表明TRIF基因参与抗病免疫应答反应。
马昭等发现中药复方多糖可能与淋巴细胞表面TLR4结合,可以通过下游TRIF依赖性信号转导通路,调控细胞免疫。

兔疫球蛋白(IgM)是蛋白质的一种在鱼体受到外界刺激之后,产生的一种可以进行抵抗的蛋白质类抗体。IgM是硬骨鱼体内主要的免疫球蛋白,在宿主防御病原菌感染方面发挥着重要作用。
Yin等证实IgM在尼罗罗非鱼宿主对细菌感染的防御中发挥了重要作用。 靳二辉等研究发现中草药复方制剂对法氏囊组织结构及免疫抗氧化功能均有明显改善,对法氏囊增殖和凋亡相关基因表达有明显调控作用。

覃川杰等发现TLR2在瓦氏黄颡鱼抵御嗜水气单胞菌侵染的过程中发挥了重要的免疫作用。葛辉等发现斜带石斑鱼不同组织中免疫相关基因免疫球蛋白(IgM)和CD4在鳃中的表达量最高,在其他组织部位的表达量相对较少,HSP90在鳃和肝中的表达量相对较高,在心和肌肉的表达量较低。
许友卿等发现, 基础饲料中添加杜仲叶粉能显著促进青鱼的生长性能,并提高其免疫功能IgM肾中的各基因表达差异显著(P>0.05)。
李春涛研究表明黄颡鱼免疫球蛋白在免疫反应中具有重要作用。马淑芳等发现当归多糖可激活TLR22及其下游相关基因,并在免疫调节过程中起到重要作用。
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