随着养殖业在防疫与治疗上对抗生素的依赖性逐渐增大，耐药性、药物残留等问题便接踵而至，大肠杆菌又属于多血清型和变异型强的细菌，极易产生耐药性。现在肉食产品不断进驻商品市场，食品安全问题又层出不穷，因此，耐药性、药物残留便成了亟待解决的问题之一。
中草药以其抗菌、消炎不易产生耐药性、无毒（低毒）、无残留（低残留）、等特点脱颖而出。为将传统中药应用于畜禽疾病防治而进行更深入的探索，充实中药理论实际运用的可行性，笔者选用6味中草药及其配伍方剂提取物对三株大肠杆菌进行了体外抑菌试验，以期为临床治疗提供科学依据。
一、材料与方法
1、材料
1、1 实验菌株 大肠杆菌1（O111：K58）、大肠杆菌2（O128：K67）、大肠杆菌3(O44：K74), 来自吉林农业大学预防兽医学微生物实验室。
1、2培养基 普通肉汤培养基、普通琼脂培养基、ss琼脂培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、伊红美兰琼脂培养基、改良马丁肉汤培养基（加微量酚红）。
1、3 单味药物 板蓝根、黄连、鱼腥草、金银花、蒲公英、大青叶。
1、4 配伍方剂
方剂一：黄连、鱼腥草、蒲公英三味中药组成。
方剂二：板蓝根、黄连、鱼腥草、金银花、蒲公英、大青叶六位中药组成。
方剂三：金银花、板蓝根、鱼腥草、黄连、大青叶五味中药组成。
2 、方法
2、1 药液的制备 每味中草药均按照水提法进行煎煮，加热至沸后改用文火保持30min，用纱布过滤，滤渣按照上述方法再煎煮俩次，合并三次滤液，浓缩至含生药1g/ml，后用1000r/min离心机离心15min，取出上清液置于试管中，贴标签备用，按照配伍方剂要求，分别取等量药液，依次配出三个配伍方剂，置于试管中，贴标签备用。最后，依次调PH值
至7.4～7.6之间，置于100℃灭菌箱中10min后，取出置于4℃冰箱中保存备用（一周内用完）。
2、2 培养基的制备 普通肉汤培养基、普通琼脂培养基、ss琼脂培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、伊红美兰琼脂培养基、改良马丁肉汤培养基（加入微量酚红），均按照常规方法配置, 但是为了提高培养基的可用率，在需要加蛋白胨的培养基中，再多加入10g蛋白胨）。调节ph值至7.2～7.6之间，高压灭菌, 制成平板培养基（除肉汤培养基），冷却后置于无菌室备用。
2、3 菌液的制备 从分离菌株试管的斜面上挑取2～3接种环的细菌分别接种于SS琼脂培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、伊红美兰琼脂培养基上,置于37℃培养箱中培养12～18h后,观察大肠杆菌的成长情况,从牛肉膏蛋白胨培养基上挑取乳白色的单个菌落,接种于5mL普通营养肉汤中, 置37℃培养箱中培养24～36h后, 取0.5mL于普通琼脂平板上培养8～12h后,用灭菌生理盐水洗下菌落并稀释, 后用平皿倾注法估测活菌数后稀释至1.0×109CFU/mL, 即为试验菌液。
2、4 最小抑菌浓度(MIC) 利用试管二倍稀释法。首先，向灭菌试管中加入1mL的改良马丁肉汤培养基,依次编号,之后在第1管内加入药液1mL,混匀后吸取1mL,至第2管,依次类推至第9管弃去1mL,然后于每管中加入0.1mL改良的马丁肉汤培养基作1×1000稀释(约含1.0×105 CFU/mL)的菌液,第10管作为阳性对照,第11管作为阴性对照。第1管至第9管药物浓度(mg/mL)分别为1000、500、250、125、62.5、31.3、15.7、7.8、3.9,37℃培养18～24h,观察结果。以培养物透明、不显红色的药物浓度为该药物的最小抑菌浓度(MIC)。从该试管中取0.01mL培养物接种到普通琼脂平板上,于37℃培养箱中培养24～48h,以菌落数少于3个视为无细菌生长,以无细菌生长的药物最低浓度作为该药的最小杀菌浓度(MBC)。重复试验3次,取其结果平均值。
二、 结果
6味中草药及其配伍方剂对三种血清型大肠杆菌的最小抑菌浓度见下表。
6 味中草药及配伍方剂对3 种大肠杆菌的M IC 和 MBC /mg·mL- 1
从上表结果可以看出,黄连的MIC和MBC为7.8mg/mL和15.7mg/mL,方剂三MIC和MBC为15.7mg/mL和65.0mg/mL。其中单味黄连和方剂三的MIC值最小,分别为7.8mg/mL和15.7mg/mL。表明黄连和方剂三对所选用的大肠杆菌1(O111：K58)大肠杆菌2(O128：K67)和大肠杆菌3(O44：K74)抑菌效果较明显。
三、讨论一下
1 、大肠杆菌病主要发生于密集化养禽场，各种禽类不分品种性别、日龄均对本菌易感。特别幼龄禽类发病最多，如污秽、拥挤、潮湿通风不良的环境，过冷过热或温差很大的气候，有毒有害气体（氨气或硫化氢等）长期存在，饲养管理失调，营养不良（特别维生素的缺乏）以及病原微生物（如支原体及病毒）感染所造成的应激等均可促进本病的发生，由此可见本病对禽类的危害之大。
2 、大肠杆菌病已经成为威胁畜禽业发展的主要细菌性疾病之一。大肠杆菌的血清型较多,具有地域差异性,在防治上多采用抗生素治疗,但由于其极易产生耐药性，药物残留等现象，因此急需另一种治疗方式进行优化，而中草药治疗以其抗菌、消炎、不易产生耐药性的特点特点脱颖而出。
3 、最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration, MIC）：在特定环境下孵育24h，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于定量测定体外抗菌活性。本实验利用二倍稀释法测定各血清型大肠杆菌的最小抑菌浓度，通过在培养基中加入指示剂而鉴定抑菌情况。若培养基不变红色时，说明无细菌生长或仅有少量细菌生长，这样便可以更直观地判断结果。由于每种中草药及各配伍方剂的药性与抑菌作用各不相同，因此对三株大肠杆菌的抑菌程度不同，因此各自的最小抑菌浓度也各有区别。
由于黄连对该菌的抑制作用较强，因此黄连的MIC最小，而方剂三的MIC次之。单味中药抑菌作用较好，但方剂也有其优势。方剂的优点在于，它不仅可以抑菌，同时还有调理动物机体的作用，从而增强其抵抗力。综上，单味中草药黄连以及由金银花、板蓝根、鱼腥草、黄连、大青叶组成的组方三对大肠杆菌具有良好的抑菌作用。
4、 中草药的抑菌浓度是抗生素的1000倍级,这在中草药目前的炮制和使用情况下难以达到如此高的体内浓度,单味中草药还不能完全替代抗生素,因此应在中草药和抗生素联合使用上进行研究,可以减少耐药性和抗生素残留。
5、 本实验采用二倍稀释法对三株大肠杆菌进行最小抑菌浓度的测定，通过在培养基中加入指示剂，此法不仅可以直观的看出各味中草药及配伍方剂对大肠杆菌的抑菌效果，而且还可以比较准确的测出其对三株大肠杆菌各自的抑菌浓度。既直观有方便，而且药量比较精确。因此，对中草药的广泛应用提供了有利条件。
综上，单味中草药黄连以及由金银花、板蓝根、鱼腥草、黄连、大青叶组成的组方对大肠杆菌具有良好的抑菌作用。
作者：王莹莹