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Ⅰ. 操作注意事项及维护
1. 流动相瓶应使用高硼硅酸酸盐材质,应定期清洗(装水相瓶,使用前清洗,其他建议每周一次),可用毛刷(或醮少量洗衣粉)清洗。如果使用了洗衣粉清洗的,注意先用自来水冲洗4-5次,再用纯化水荡洗2-3次。长时间不用应干燥保存。不建议直接使用4L溶剂瓶。

2. 瓶中过滤头应定期清洗(至少每周一次)。溶剂可选择热水超声30min,100%异丙醇超声30min,可根据实际情况重复进行多次。砂型的禁止超声,可以用30-35%硝酸浸泡1hr,然后用纯化水清洗4-5次。
3. Waters在线过滤器滤芯应定期超声清洗(至少每周一次),溶剂可选择热水超声30min,100%异丙醇超声30min,可根据实际情况重复进行多次。拆卸时注意螺丝不要拧反,安装时不应过度拧紧,以防造成拆除困难或拧断。不要拧下面的小螺丝。
4. 单向阀和主动阀芯(Agilent)应定期清洗(经常使用*腈乙**的建议每周一次),溶剂可选择水超声5min,100%异丙醇超声5min。拆卸时注意螺丝不要拧反,安装时不应过度拧紧,以防造成树脂部分变型,且影响性能。
5. *腈乙**应该用棕色流动相瓶盛装,水据情况考虑。水相流动相及*腈乙**超过3天应重新抽滤或新配,甲醇时间可以延长(一般15天),含水有机流动相使用一般不得超过7天。应观察流动相瓶中是否有悬浮物,及瓶底瓶壁是否有白色附着物。
6. 一般规定A通道为水,B通道为*腈乙**,C通道为甲醇,D通道为缓冲盐,适用各品牌仪器(安捷伦特殊)及方便大家操作。各管道使用应相对固定,调换管道使用时(含维护),不能将含盐的管道直接放入纯有机流动相瓶中使用,可以先用超纯水冲洗管道、滤头外表液体后放入水流动相瓶中,进行灌注后再放入有机相瓶中灌注后使用。同样,纯有机相管道应先用水过渡后再放入含盐流动相瓶中灌注后使用。
7.柱塞杆密封清洗液:10%异丙醇或10%甲醇溶液。针头清洗液:与对照品溶剂一致,大部分可用50%甲醇溶液。
8. 流动相应恢复到室温后使用。
9. Waters单机版使用前先开电脑,等3分钟,再开仪器主机(H-Class为FTN),自检完成后,再开工作站。较长时间停机后使用,检测器应等开启流速1min后再打开电源开关。
10. 分析前各管道灌注及清洗:
Waters 2695/e2695应灌注柱塞密封清洗管路(Prime Sealwash 1-2分钟)、洗针清洗灌注(Prime NdleWash 2-3次)、进行流路排气(Wet Prime 5ml/min,A、B、C、D各5min)、进样注射器灌注(Purge Injector 1-2次)。
Waters H-Class 应灌注QSM(密封清洗、A、B、C、D各5min)、灌注FTN(清洗溶剂120秒,清除溶剂60次)。
Agilent流路排气(5ml/min,A、B、C、D各5min)。更换洗针液时,右击进样器“针清洗”清洗60S。更换密封清洗液时,右击泵模块“密封垫清洗流路注入”清洗2min。

11. ELSD流动相不能使用磷酸等不挥发性盐。注意开关机顺序:开机——开气、升温、最后开流速;关机——停流速、保持温度、降温、关气。所使用空气发生器每次使用后应进行废水排放,奥泰ELSD废液瓶应及时倾倒。
12. 不能长时间使用三氟乙酸、四氢呋喃、*酮丙**、二氯甲烷等有机溶剂,会损坏PEEK材料及密封垫圈;NaCl、KCl、NH4Cl等会腐蚀不锈钢材料。绝对禁止在管路中长时间静置保存。使用完成后先用5-10%甲醇进行冲洗,然后用甲醇进行冲洗。
13. 非特殊供试品,不建议开启样品温控。样品序列较长,配制的供试品放置时间较长,应注意查看进样小瓶是否有固体析出。
14. 平衡色谱柱和冲洗色谱柱时可以不开启检测器,以减少灯不必要的消耗。可以第一针Waters“功能”设置为“平衡色谱柱”(Agilent“进样源”选择“无进样/仪器空”)。若两次使用时间间隔不超过4hr不要关闭检测器灯。Waters部分仪器开关电源会造成Lace机死机,可以用方法进行关闭灯。
15. 活化色谱柱,再生色谱柱,工作时间的色谱柱冲洗,柱后废液应不经过检测器,防止污染检测池。
16. 建议不要使用*腈乙**保存色谱柱和液相色谱系统,*腈乙**聚合物可能污染和堵塞色谱柱和系统。
17. 使用了缓冲盐流动相,实验结束后:Agilent仪器,应对进样器主路和旁路反复切换5-10次,以冲洗流通阀的流路和沟槽。Waters仪器应执行清洗柱塞2分钟。
18. 针座有白色盐析,应用纯水洗瓶冲洗干净后,拭干。管道接口有白色盐析,可用棉签粘水进行擦洗。Waters无漏液感应的可直接用纯水洗瓶冲洗干净后拭干。
19. 流路维护:
*腈乙**/缓冲盐污染后维护:拆除色谱柱,接双通,A、B、C、D各设置为25%,流速4ml/min,70℃热水30min,100%异丙醇30min。
藻类/细菌污染后维护:拆除色谱柱,接双通,A、B、C、D各设置为25%,流速4ml/min,1:2=84溶液:水(V/V)30min,超纯水30min,100%异丙醇30min。
一般维护:拆除色谱柱,接双通,甲醇:*腈乙**:水:异丙醇-1:1:1-:1,流速4ml/min,冲洗4hr以上。
20. 其他维护:仪器外表、桌面擦拭、废液倾倒;奥泰ELSD溢流瓶变色长菌应进行换水。
Ⅱ. 简单常见故障判断及处理
故障:自检超压。(Waters2695)
原因:在线过滤器堵塞。
处理:1.拧松排空阀。2.超声清洗在线过滤器滤芯或更换。
故障:状态(STATUS)灯闪(Waters)。
原因: 1.检测池有气泡。2.灯故障。3.光路故障。
处理:1.开启流速后,重启检测器。2.更换灯。3.报修 。
故障:无压力。
原因: 1.是否开启流速。 2.管道跑空。 3.单向阀粘滞。 4.硬件故障。
处理:1.开启流速。2.补充溶剂,灌注排气泡。3.超声单向阀。4.报修。
故障:压力高。
原因:1.流路堵塞。 2.柱温太低。 3.流动相种类和比例是否正确。4.硬件故障(传感器)。
处理:1.排查流路堵塞位置,清洗/更换在线过滤滤芯,更换管道,更换预柱柱芯,更换色谱 柱,管道反冲。2.升高柱温。3.使用正确溶剂和比例。4.报修。
故障:压力低。
原因: 1.漏液。 2.溶剂滤头堵塞。 3.色谱柱固定相流失。4.硬件故障(泵流量或比例不准,传感器)。
处理:1.重新拧紧接头。2.清洗/更换溶剂滤头。3.更换色谱柱。4.报修
故障:压力波动大。
原因:1.流路有气泡。2.溶剂滤头堵塞。 3.自混溶液是否混匀。
4.单向阀芯/主动阀芯污染。5.硬件故障(比例阀、单向阀(Agilent主动阀))。
处理:1.灌注排气。2.清洗/更换溶剂滤头。3.重新配置流动相。4.超声清洗单向阀芯/主动阀芯。5.报修。
故障:基线不平(漂移、噪音)。
原因:1.压力波动。 2.柱温、环境温度、流动相温度影响。
3.流动相污染。 4.检测池污染。 5.电压波动、电磁干扰
或静电引起。 6.硬件故障(灯等)。
处理:1.排查原因并处理。2.排查原因并处理。3.重新配置流动相。4.清洗检测池。5.消除干扰。6.报修
故障:保留时间波动。
原因:1.压力异常。 2.柱温、环境温度、流动相温度影响。
3.流动相是否混匀。 4.系统平衡时间是否充足。
5.采集方法是否设置正确。6.硬件故障
处理:1.排查原因并处理。2.排查原因并处理。3.重新配置流动相。4.延长平衡时间。5.采用正确采集方法。6.报修
故障:峰面积系统适用性不符合要求。
原因:1. 保留时间是否正常。 2.进样小瓶是否正常。
3.洗针液是否充足并已灌注、是否设置洗针、溶剂是否选择正确。
4.管路漏液。 5.注射器有气泡或漏气。
6.积分方法是否正确。7.基线是否影响积分。
8.对照品/供试品是否配制正确,是否稳定。
9.其他硬件故障。
处理:1.排查原因并处理。2.排查原因并处理。
3.补充洗针液并灌注、正确设置洗针、选择合适洗针液。
4.排查原因并处理。5.清除气泡或更换注射器。
6.设置合适积分方法。7.排查原因并处理。
8.重新配制。
9.报修。