色谱重叠峰算法论文 (色谱基线漂移怎么解决)

【原创】色谱峰漂移的案例分享

在日常的液相色谱使用过程中，我们经常会遇到色谱峰的漂移问题，进而导致无法准确定性、定量分析，很是困扰。现将工作中遇到的几个有趣的案例做如下分享，为大家抛砖引玉，提供一些色谱峰漂移的解决思路。

01 色谱柱

1.1 色谱柱的改性

案例1：我们做聚维酮中乙烯吡咯烷酮的残留测定（色谱参数见表1-1），已经过多次检测均正常，当更换了新色谱柱后，发现色谱峰不断漂移（色谱图见图1-1）。

表1-1 聚维酮中乙烯吡咯烷酮检测条件

图1-1 新色谱柱下乙烯吡咯烷酮色谱峰（连续4针150%线性溶液）

在排除了仪器故障等因素后，我们配制了0.1% 的乙烯吡咯烷酮水溶液，按照表1-1的流动相方式，低流速（0.2~0.3ml/min）冲洗色谱柱进行改性，24小时后，再进样分析，色谱峰不再漂移，见图1-2，经过数月分析检测，色谱峰均正常。

图1-2 改性后的乙烯吡咯烷酮色谱峰

案例2：在进行苯磺酸氨氯地平中苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯的测定时（色谱参数见表1-2），多次检测均正常，当更换了新色谱柱后，发现苯磺酸色谱峰不断漂移（色谱图见图1-3）。

表1-2 苯磺酸氨氯地平中MES 、EBS 检测条件

图1-3 新色谱柱下苯磺酸氨氯地平色谱峰（连续6针100%准确度溶液）

在排除了仪器故障等因素后，我们配制了低浓度的苯磺酸溶液，按照色谱条件里的流动相起始比例，冲洗色谱柱进行改性，24小时后再进样，色谱峰均正常，见图1-4。经多次检测，色谱峰均正常。

图1-4 改性后苯磺酸氨氯地平色谱峰（连续6针100%准确度溶液）

总结：

以上2个案例我们发现，用旧的色谱柱进行检测时，色谱峰重现性良好，换成新柱子，色谱峰不断漂移，这可能是由于色谱柱填料中原本存在的一些裸露基团对被测化合物有影响，而旧色谱柱中的裸露基团已经被其他样品饱和，从而无意中完成了改性。另外我们在气相方法开发中也发现类似现象，这可能也是其他老师经常建议我们做方法开发时用新色谱柱的原因。

1.2 色谱柱的平衡

常规的反向色谱体系，平衡时间相对较快，这里暂不过多赘述。对于离子对试剂体系，等度居多，虽然等度相对梯度简单了许多，但可能仍需要花费较长时间达到色谱柱的平衡，我们项目中曾遇到过2个小时才能完全平衡的体系；如果是梯度，最后回到初始比例的平衡时间需要特别关注，请看案例分析。

案例：某离子对试剂为流动相的液相方法，梯度运行，最后回到初始比例的平衡时间为10min。在运行过程中发现，连续进样，色谱峰出现不断漂移，一次偶然中发现仪器不停流速，每进一针，间隔一段时间再进下一针，这种方式下，色谱峰却能很好重合，随后考察了平衡时间，10min、15min、20min、30min，结果发现，平衡时间为15min、20min、30min连续进样的色谱峰，均能很好重合，可见，10min 的平衡时间是不够的。

02 流动相的过滤头

案例：普通的反向体系，色谱峰出现无规律的漂移，但均晚于以往正常时候的保留时间，通过排查，更换了流动相的玻璃滤头后，色谱峰出峰稳定。推测可能是由于玻璃滤头出现轻微堵塞，使得真实流速比正常的理论流速小，进而出现出峰延迟现象。

03 主动阀阀芯

案例：在使用安捷伦1260液相色谱做有关物质检测中，一个含有5个杂质的定位混标样品（按照出峰先后顺序命名为MIX-1~5），出现色谱峰漂移，并且从5个杂质变成了4个杂质，其中的MIX-5 不见了，通过峰面积的比对发现，原来MIX-5 和前面的MIX-4 峰发生了重合。压力线、基线均正常。最后通过一系列排查，发现是其中一个泵的主动阀阀芯出了问题，我们对其进行了超声清洗，重新运行序列，5个杂质的定位混标溶液出峰正常。项目中经常会遇到比较明显的因主动阀阀芯故障带来的色谱峰漂移问题，比如基线呈现规则或不规则的锯齿状、压力线波动较大等。同时还发现阀芯一旦出现问题，虽经超声清洗可暂时恢复正常，但也只是强弩之末，很快就又不行了，需要更换新的阀芯。

除了上述色谱峰漂移的案例，还有其他很常见的案例，比如泵密封圈破损出现的微漏、空调口正对仪器使得仪器表面温度发生波动、流动相长期放置pH 值发生变化、色谱柱运行了高浓度的API 或者辅料后被污染等，都有可能导致色谱峰的漂移。