Adv. Funct. Mater.｜微针贴片递送多孔硅限域纳米酶高效治疗黑色素瘤

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*本文首发于“纳米酶Nanozymes”公众号，2023年10月6日

*编辑：张晓婷

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摘要

全球每年新增的皮肤癌患者超过一百万，并且发病率在过去几十年中不断上升，其中只有4%的患者罹患皮肤黑色素瘤(CM)，但死亡率却高达80%。CM与其他恶性肿瘤的不同之处在于其主要发生在皮肤的表皮和真皮层，而非深层组织。CM死亡率高的一个重要原因是缺乏可靠有效的治疗方法。手术切除病灶和邻近皮肤组织是目前CM的主要治疗方法，但手术切除的恢复期较长，且伤口部位易感染。免疫疗法是一种新兴的治疗方式，但治疗过程的复杂性和重编码细胞的长期存活性仍有待改善。黑色素瘤特殊的低 DNA 损伤和多重 DNA 修复特性导致其对放射疗法具有抵抗性。因此，开发创新高效的黑色素瘤治疗方法对提高患者存活率至关重要。

近日，浙江大学化学系邬建敏课题组在Advanced Functional Materials发表了题为“Microneedle Patch Integrated with Porous Silicon Confined Dual Nanozymes for Synergistic and Hyperthermia-Enhanced Nanocatalytic Ferroptosis Treatment of Melanoma” 的工作。研究人员设计了一种双纳米酶负载的多孔硅(PSi)集成的微针(MNs)贴片，通过MNs将纳米酶复合物准确递送到肿瘤部位，以实现对肿瘤微环境(TME)的双向调节，触发铁死亡反应治疗黑色素瘤。得益于PSi的孔道限域效应，铜掺杂石墨烯量子点和钯纳米颗粒共负载的PSi (CuGQD/PdNPs@PSi)显示出协同催化效应，表现为增强的类过氧化物酶(POD)和谷胱甘肽氧化酶(GSHOx)活性。CuGQD/PdNPs@PSi比单限域纳米酶或非限域纳米酶体系的活性高出约2-3倍。此外，CuGQD/PdNPs@PSi的协同催化性能可通过近红外光(NIR)照射诱导的光热效应得到改善。进一步地，CuGQD/PdNPs@PSi可诱导铁死亡反应，表现为脂质过氧化物(LPO)上调和谷胱甘肽过氧化物酶4(GPx-4)失活。研究人员将纳米复合物装入MNs，给药后对黑色素瘤生长抑制率(TGI)在14天内达到了令人满意的98.8%。因此，封装CuGQD/PdNPs@PSi的MNs可以为肿瘤治疗提供一种潜在的纳米催化诱导铁死亡策略，同时也能满足根除浅表肿瘤的医疗需求。

图1. 负载双功能纳米酶(包括铜掺杂石墨烯量子点(CuGQD)和钯纳米粒子(PdNPs))的PSi集成微针通过纳米催化策略诱导皮下黑色素瘤铁凋亡的示意图。

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实验内容

研究人员利用PSi孔道表面的Si-H键将Pd(II)盐原位还原得到PdNPs@PSi，这种通过原位还原负载的PdNPs具有良好的分散性及稳定性。之后，利用静电相互作用将通过一步水热法制备得到的CuGQD与PdNPs@PSi结合，得到纳米酶复合体系CuGQD/PdNPs@PSi。所制备的CuGQD/PdNPs@PSi光热转换效率为57.8%，明显优于已报道的其他钯基光热剂，且具有良好的光热响应稳定性(图2)。

图2. (a) CuGQD/PdNPs@PSi的制备示意图；(b) CuGQD/PdNPs@PSi的TEM图像和(c) HRTEM图像；(e-g) CuGQD/PdNPs@PSi的XPS光谱；(h) 不同材料和 (i) 不同浓度的CuGQD/PdNPs@PSi的在NIR刺激下的温度响应曲线；(j) CuGQD/PdNPs@PSi受NIR照射五个周期后的温度变化曲线。

研究发现双纳米酶限域复合物的类POD和类GSHOx催化效率均明显优于单限域纳米酶或非限域纳米酶体系。CuGQD/PdNPs@PSi的类POD催化效率远高于CuGQD@PSi和PdNPs@PSi，证明在PSi*共中**负载双纳米酶可提高底物的传质及吸附能力，加快催化反应速率。类GSHOx研究表明，虽然PdNPs@PSi不具备类GSHOx性质，但 CuGQD/PdNPs@PSi的催化效率是CuGQD@PSi的3倍，这可能与限域条件下双纳米酶体系的快速电子传递有关。上述稳态动力学结果首次证明了 PSi 纳米孔道的限域特性可赋予双纳米酶协同的类POD和类GSHOx活性。研究人员还证明了NIR照射导致的热效应可提升CuGQD/PdNPs@PSi的类POD和类GSHOx催化性能。体外实验结果证明，与CuGQD@PSi和PdNPs@PSi相比，CuGQD/PdNPs@PSi在细胞实验中表现出更出色的类POD和GSHOx性能，可以诱导有效的细胞内铁死亡。通过NIR刺激诱导的高温可进一步促进铁死亡进程。

研究人员将CuGQD/PdNPs@PSi集成到聚合物基质中，通过分步浇铸法制备了一种专门用于黑色素瘤治疗的可溶解微针贴片。所制备的CuGQD/PdNPs@PSi MNs具备足够的机械性能穿透角质层，可在60s内快速溶解并释放纳米酶复合物。此外，CuGQD/PdNPs@PSi MNs保持了良好的光热性能(图3)。

图3. CuGQD/PdNPs@PSi MNs的制备流程图及相关表征。

在CM模型动物实验中，施加NIR照射的CuGQD/PdNPs@PSi MNs组表现出最为显著的黑色素瘤治疗性能。免疫荧光分析证明CuGQD/PdNPs@PSi MNs + NIR 组可以最有效地*伤杀**黑色素瘤细胞并抑制其增殖。并且CuGQD/PdNPs@PSi MNs + NIR 组GPx-4水平下调最明显，证明制备的微针系统通过GPx-4表达水平的降低诱导了铁死亡的发生，从而产生了良好的抗黑色素瘤效果(图4)。

图4. (a) 黑色素瘤体内治疗示意图；(b) 不同治疗过程中荷瘤小鼠的热成像图片；(c) 不同治疗组的肿瘤体积曲线；(d) 不同治疗14天后荷瘤小鼠(左)和解剖肿瘤(右)的照片；(e) 不同治疗后荷瘤小鼠主要器官的H&E染色分析；(f) 肿瘤切片的H&E、TUNEL、Ki67 和 GPx-4 分析。

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总结

近年来，邬建敏教授课题组在PSi诊疗一体化方面开展了系列工作，提出了氧化刺激诱导的FRET调控机理，实现了基于PSi体系的双色比率荧光传感(ACS Nano, 2017, 11, 8, 7938-7949); 提出基于PSi比率荧光及酶催化体系的汗液葡糖糖检测方法，通过手机拍照即可实现糖尿病人的血糖管理(ACS Sens., 2020, 5, 7, 2096-2105); 发现了PSi载药体系与金属纳米颗粒的协同抗菌作用(ACS Appl. Mater. Interfaces, 2021, 13, 14, 16127-16141)；发现了PSi载体降解产物硅酸盐离子自身的促内皮细胞生长、迁移及促血管生成的的机制(Biomaterials, 2021, 272, 120772)，构建了具有光热响应特性的高分子—PSi复合载药体系(ACS Appl. Mater. Interfaces, 2022, 14, 43, 48368-48383)；发现了光热分子在限域条件下的光热增强现象及机制，并开发了一种光热生物传感器及诊疗体系(J. Control. Release, 2023, 359, 428-440)。本项工作创造性地提出了PSi孔道限域下的多纳米酶协同催化体系，实现了对复杂TME多重代谢特征的调控，进而利用纳米催化体系的光热特性实现高效的刺激响应肿瘤治疗。此外，将多纳米酶负载的PSi复合催化体系与微针给药方式结合也是本项工作的创新点之一。这种集成纳米酶复合体系的微针贴片治疗具有广泛的可拓展性，有望在多种临床场景中得到普遍应用。

撰稿 | 赵靖雯

审阅 | 孙琦

编辑 | 张晓婷