化疗14次，放疗20次，全胃切除. ....从2018年到2020年，整整两年，40岁的广州孙先生（化名）全国求医，吃尽苦头，依旧打败不了肿瘤界的“变色龙”—— 弥漫大B细胞淋巴瘤 ，这是成人淋巴瘤中最常见的一种类型。
他想看到儿子上大学的愿望是否还能实现？
“很难，做好心理准备吧。” 2020年3月，很多家大医院告诉他，他的腹腔内多发淋巴瘤病灶且侵犯了肠壁，多次的放化疗依旧阻挡不了爱打“游击战”的淋巴瘤，四处求医，四处碰壁，看似现代医学已经奈何不了它了。
可孙先生的儿子高考还要两年，他不甘心，他要继续与淋巴瘤“战斗”，他要跟时间赛跑， “只要活着看到孩子上大学，死了也能闭眼了。”
为求最后一线生机，他来到杭州求医。这一次，医生告诉他，“我们一起搏一把。”
今天，这家帮他战胜淋巴瘤的医院想分享一个重磅好消息。
2022年8月31日23:00，浙江大学医学院附属第一医院黄河教授团队开展的临床研究成果在国际顶级期刊《Nature》以论著形式在线发表《Non-viral, specifically targeted CAR-T cells achieve high safety and efficacy in B-NHL》（《CRISPR/Cas介导的非病毒定点整合CAR-T 细胞治疗复发/难治性 B 细胞非霍奇金淋巴瘤具有高安全性及有效性》），浙大一院胡永仙主任医师等为论文共同第一作者，黄河教授为第一通讯作者，刘明耀教授为共同通讯作者，其团队成员张楫钦为第一作者。（文章网址https://www.nature.com/articles/s41586-022-05140-y）
《Nature》作为生命科学领域的顶级期刊之一，所发表的论文为生命科学技术领域最具有权威性和创新性的研究成果。 文章中提到的“CRISPR/Cas介导的非病毒定点整合CAR-T 细胞”就是帮孙先生消灭淋巴瘤的“*器武**”，这意味着有更多像孙先生一样的淋巴瘤患者可以通过这个技术获得新生。
作为CAR-T 细胞，为什么加了拗口的前缀就可以登上国际顶级期刊《Nature》？
CAR-T治疗是什么？
很多人可能对CAR-T 治疗不是很熟悉，黄河院长团队的胡永仙主任医师解释道，CAR-T治疗的原理是用血细胞分离机成功采集到足够的T淋巴细胞，然后再给这些细胞装上了针对性识别癌细胞的“GPS导航系统”， 让这些原本对于*伤杀**癌细胞“无能为力”的T淋巴细胞，成为了精准打击癌细胞“弹无虚发、百发百中”的“导弹”。
胡永仙主任医师表示，平时我们所说的CAR-T 细胞是通过 病毒转染 的方式让T淋巴细胞装上针对性识别癌细胞的“GPS导航系统”。但用这种制备方式得到的CAR-T 细胞存在几个弊端。比如，它的“GPS导航系统”是随机插入到T淋巴细胞的基因片段中，会导致制备出来的CAR-T 细胞质量良莠不齐，并且可能还存在随机插入基因片段会导致肿瘤基因改变的风险。
“目前的CAR-T细胞产品对难治复发淋巴瘤的 完全缓解率约为50% ，还有相当数量的患者会合并细胞因子释放综合征以及神经毒性综合征。”胡永仙主任医师表示， 淋巴瘤作为实体瘤 ，CAR-T细胞需要通过障碍物才进去实体瘤中进行杀敌，原本CAR-T细胞进入血液中碰到各种细胞会做 “点刹车”减速运动 ，一路减速运动下来，等找到实体瘤时，CAR-T攻克实体瘤的“火力”就没那么强了。
如何去掉“刹车”，以及如何结合非病毒定点靶向基因转导技术，从而消除目前CAR-T制备方法存在的不足，并进一步对免疫细胞中的关键基因进行改造，达到更好的疗效和更低的毒副反应，这成了全球CAR-T细胞研究领域的卡脖子问题。
用诺贝尔奖技术实现去“刹车”
针对CAR-T细胞领域的痛点，刘明耀教授团队与黄河院长团队利用 2020年获诺贝尔奖的CRISPR/Cas9基因编辑技术 ，对T淋巴细胞中 PD1位点精确敲除 ，定点插入针对肿瘤细胞的靶向CD19 CAR分子，构建完成全新的非病毒定点整合CAR-T细胞（PD1-19bbz），并首次在人体内完成Ⅰ期临床研究，验证了新型CAR-T细胞的安全性及有效性。
我们可以把 CRISPR/Cas9 基因编辑技术看成是一把 “剪刀” ，而 PD1位点 则是T淋巴细胞的 “刹车” ， CD19 CAR分子 则是我们上文中所说的 “GPS导航系统” ，我们用“剪刀”把带有“刹车”的片段剪掉，并且把“GPS导航系统”装到原本是“刹车”的位置，整合成 CAR-T细胞（PD1-19bbz） 。
新型CAR-T细胞（PD1-19bbz）既没有“刹车”，也不是病毒转染，同时又没有神经毒性，看似是专杀淋巴瘤的硬核*器武**，那么实际呢？
2020年，孙先生在治疗走投无路之时，通过广东的经管医生推荐来到浙大一院，黄河教授表示，淋巴瘤侵犯肠壁是CAR-T治疗的相对禁忌症，在接受CAR-T细胞治疗时容易发生肠穿孔，所以他已不再适合接受传统的CAR-T细胞治疗。
而全新的PD1-19bbz CAR-T细胞，因为发生细胞因子风暴和其他并发症的发生风险低，值得一搏，给孙先生了一个新生的契机。
他终于等到儿子上清华大学的这一天
2020年5月26日，孙先生接受PD1-19bbz CAR-T细胞输注，回输后2020年6月9日，孙先生CAR-T细胞回输后14天各项指标正常，经评估后出院，在回输后1个月进行PET-CT评估原腹腔侵犯肠道粘膜部位的大包块肿瘤已完全消失。
如今孙先生无病生存已超过2年 。在最近的一次随访中，孙先生的所有检查项目均达标，体重也比患病前增加了不少，脸色看起来也更红润了。“经过细胞治疗后身体感觉一下子就恢复正常了，亲朋好友也都说我是奇迹般地康复了，现在闲暇时还会去打打羽毛球，完全恢复了患病前的生活状态。” 孙先生使用的就是全球首次利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在PD1位点实现定点整合的CAR-T细胞产品。
时隔两年，2022年夏天，孙先生给杭州的医护人员们分享了好消息： 儿子确定被清华大学美术学院录取 ！
研究结果表明，PD1-19bbz无论在PD-L1高表达还是低表达的肿瘤细胞中， 都体现出更强大、更持久的*伤杀**效果，小鼠生存率得到显著提高 ；进一步开展临床研究表明：在接受治疗患者中 未观察 到CAR-T治疗相关的神经毒性和2级以上的细胞因子释放综合征，证明PD1-19bbz具有出色的临床安全性。用PCR技术和流式细胞术方法检测发现PD1-19bbz在患者体内可获得快速扩增和长时间的维持。
在这项I期临床试验中，难治复发淋巴瘤患者的客观缓解率高达100%， 完全缓解率达到87.5% 。利用单细胞测序技术研究结果表明，PD1-19bbz产品中存在高比例的记忆性T细胞，体内PD1-19bbz具有更强的*伤杀**肿瘤作用，长期存续的CAR-T细胞具有记忆性细胞的特征。 全面阐明了非病毒PD1定点整合CAR-T细胞优越的临床疗效背后的作用机制。
该成果获得了加利福尼亚大学Justin Eyquem教授和Nature资深编辑Victoria Aranda的高度评价：“全面系统的临床前研究，成功开发了非病毒定点整合CAR-T疗法，并报道了首个PD1下调定点整合型CAR-T细胞的临床试验结果。研究人员在临床治疗中观察到了高比例的肿瘤完全缓解率，且未发现严重的毒副作用，这一令人鼓舞的结果显示出这种CAR-T疗法具有出色的临床安全性和有效性。研究人员同时也证明了非病毒定点整合T细胞治疗在临床应用的可行性。这一技术创新为未来更多基因靶向修饰CAR-T疗法的发展奠定了坚实的基础，对领域发展具有重要的推动作用。”
这项工作的成功意味着全新CAR-T细胞技术平台的建立， 也是迄今为止全球CAR-T细胞治疗难治复发淋巴瘤中高缓解率和低毒副反应的最好临床结果。标志着中国学者在CAR-T细胞研发及临床转化应用领域处于国际领先地位。