猪增生性肠炎（PPE）是由胞内劳森菌（LI）感染引起的在世界各地猪场中普遍存在的一种重要肠道疾病，以生长育肥猪腹泻，食欲下降和生长发育缓慢等临床症状为主要特征。给养猪业带来严重经济损失。临床上对于PPE的防控，目前主要依赖疫苗免疫预防和药物治疗。胞内劳森菌的检测对于预防和控制PPE尤其重要。目前，国内主要通过PCR等方法间接地检测样品中LI核酸，缺乏直接检测感染细胞中LI的免疫学方法，这在临床分离LI时受到很大限制，因为核酸检测阳性并不能证明细菌在分离细胞上生长，因此必须加强胞内劳森菌检测诊断相关研究。
近期， 南京农业大学动物医学院范红结课题组 完成的题为 “ Preparation and application of a novel monoclonal antibody specific for the heat shock protein 60 of Lawsonia intracellularis ”的研究论文在 Journal of Integrative Agriculture (《农业科学学报》(英文)，JIA) 2023年9期正式发表。
该研究制备Hsp60单克隆抗体，并通过iELISA和Western blotting测定其特异性，使用所制Hsp60单克隆抗体进行免疫荧光和免疫组化法分析，监测胞内劳森菌感染情况。研究成功筛选、鉴定出3株能够稳定分泌抗Hsp60蛋白单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株，分别命名为3E5、4E2和9G6。以BALB/c小鼠制备相应腹水单抗，间接ELISA效价分别为1:1024000、1:2048000和1:2048000。单克隆抗体特异性检测结果显示，3E5、4E2和9G6只能与胞内劳森菌反应，而与猪霍乱沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、猪痢短螺旋体等猪肠道中常见病原菌均无交叉反应，说明制备的单克隆抗体具有良好的特异性。进一步研究发现，以上3种单克隆抗体均可与体外单层感染细胞及PPE感染猪回肠组织中的胞内劳森菌发生特异性结合。
综上所述， 该研究成功开发了针对胞内劳森菌Hsp60的单克隆抗体，且该单抗可用于检测感染单层细胞和PPE感染猪回肠组织中的胞内劳森氏菌，该研究将为胞内劳森菌临床菌株的分离及商品化免疫诊断试剂盒的开发奠定基础。
免疫荧光和免疫组化法检测PPE感染猪回肠组织中的胞内劳森氏菌。
(A) 在感染的回肠中使用单克隆抗体 (3E5、4E2、9G6) 和多克隆抗体 (pAb) 检测胞内劳森氏菌。未感染的回肠是阴性对照。胞内劳森菌被染成绿色（箭头）(B) 分别使用胞内劳森氏菌Hsp60单克隆抗体 (3E5、4E2、9G6) 和 (pAb)，通过IHC检测感染组织中胞内劳森氏菌的存在。未感染的回肠是阴性对照。胞内劳森氏菌被染成红色 (箭头)。
南京农业大学动物医学院 范红结 教授为该文章的通讯作者， 肖宁 博士和 吕云云 硕士系该论文的共同第一作者，该研究得到了国家重点研究发展计划 (2021YFD1800400)、国家自然科学基金 (31872480)、江苏省农业科技创新基金 (CX(19)2020)、江苏省高等学校优先学科发展计划 (PAPD) 的支持。
点击链接查看全文：
https://doi.org/10.1016/j.jia.2023.04.006
Journal of Integrative Agriculture (《农业科学学报》(英文), JIA) 由中华人民共和国农业农村部主管，中国农业科学院与中国农学会主办，中国农业科学院农业信息研究所承办。综合性英文学术期刊，月刊。创刊于2002年，现任主编为中国科学院院士陈化兰。JIA主要栏目有作物科学、园艺、植物保护、动物科学、动物医学、农业生态环境、食品科学、农业经济与管理等。刊稿类型有综述、研究论文、简报以及评述等。全部论文在Elsevier-ScienceDirect (SD) 平台OA出版。最新SCI影响因子4.8，位于SCI-JCR农业综合学科Q1区。中科院分区农林科学1区。2016年以来先后获得中国科协等部委 “提升计划”“登峰计划”“卓越计划”项目支持。