维生素C(VitaminC,Vc),又称抗坏血酸,是一种水溶性维生素,具有还原作用,是天然的抗氧化剂和免疫增强剂,通常被添加到饲料和水体中,以提高水产动物机体抗氧化酶的活性,缓解其氧化应激反应,应用于鱼类抵抗多种感染病的侵袭。
机体代谢期间,若缺乏Vc,动物的生长受到很大的限制,并且会被各种病症侵扰。Vc是维持鱼类正常生理功能必须的微量营养素,除鲟形目鱼类和七鳃鳗能对Vc进行合成外,另外一些鱼类因机体内没有足够的古洛内酯氧化酶,从而不具备自身合成Vc的能力,所以必须由外源补充。
罗非鱼又名非洲鲫鱼,属鲈形目(Perciformes),丽鲷科(Cichlidae),原产地非洲,主要集中在热带和亚热带地区养殖。罗非鱼是全球养殖最广泛的淡水鱼类之一,具有适应能力强、生长速度快、养殖周期短、易于饲养、出肉率高、无肌间刺、蛋白质丰富和肉质鲜美等优点。

罗非鱼属于罗非鱼品系改良遗传性状后稳定遗传的品种,继承了原始罗非鱼的优点,出肉率高,且遗传性状稳定。随着我国水产养殖业的迅速发展,水产养殖业不断追求高额经济效益,不断的扩大养殖规模。
材料与方法
本试验饲料以锌螯合Vc,Vc磷酸酯(Vc含量为35%,以及普通Vc为Vc来源,以豆粕、菜粕、棉粕等为主要原料,根据罗非鱼配合饲料标准配制基础日粮,。
各试验饲料为分别在基础日粮中直接添加100mg/kg的锌螯合Vc、Vc磷酸酯和普通Vc。本试验的Vc添加量是参照已有的研究结果,并根据试验鱼规格和结合本试验Vc产品特性等综合因素确定。
先将饲料原料分别进行粉碎,过60目筛,再用V型混合机使其搅拌均匀,并利用挤压机对其进行挤压加工,使之形成直径为2mm的饲料颗粒,之后使用55℃的温度对其进行烘干,待其冷却至室温之后放入-4℃的冰箱中进行保存备用。

1)维生素预混料为每千克饲料含有Thevitaminpremixcontainedthefollowingperkgofdiets:VA25mg,VB120.05mg,VB112mg,泛酸pantothenicacid40mg,肌醇inositol100mg,VD35mg,VK38mg,VE50mg,烟酸nicotinicacid30mg,生物素biotin0.8mg,叶酸folicacid5mg,VB68mg,核黄素riboflavin12mg。
2)矿物质预混料为每千克饲料含有Themineralpremixcontainedthefollowingperkgofdiets:KCl200mg,CoCl2·6H2O(1%)25mg,CuSO4·5H2O30mg,FeSO4·H2O400mg,MnSO4·H2O150mg,KI(1%)60mg,Na2SeO3·5H2O(1%)65mg。
3)营养水平为实测值。Thebasicnutrientsaremeasuredvalues。
试验设计
在正式进行试验之前,调试养殖循环系统设备是否正常,对养殖桶需要消毒和清洗干净后注水,从广东罗非鱼良种场购买一定数量的吉富罗非鱼鱼苗,鱼苗购买回来后放在容积为400L的循环系统养殖桶中,为了使鱼苗能够尽快适应环境,减少鱼苗应激带来的不利影响,鱼苗在养殖桶中暂养2个星期。

对其进行进一步的挑选,选出体格相近、活泼健康的鱼苗500尾(初始平均体重21.18±0.24g)进行分组,本试验设1个对照组(饲喂基础日粮),3个Vc添加组,即普通Vc组、Vc磷酸酯组和锌螯合Vc组,各试验饲料分别在基础日粮中添加100mg/kg(以Vc计)相应Vc源。
每个组设5个平行,每个平行放养25尾鱼。分组后暂养一周,正式开始试验,2019年8月13日禁食1天后14日开始采样,具体采样方法见如下样本采集。
经过63d的养殖之后,试验鱼禁食24h,以桶为单位称重。再从养殖桶中随机选取6尾鱼,称量每尾鱼的体重,随后测量体长和体高,并严格准确的记录生长数据。
使用标准为1ml的注射器从鱼的尾静脉采血,静置之后3500r/min离心15min,取上层血清分装后放入-80℃冰箱待用,用于血液生化指标的测定。
采血后的鱼置于冰盘上解剖,剥离内脏团称重,再剥离出肝脏称重,随后把肝脏装入编号后的小封口袋中,放入-80℃冰箱待用,用于肝脏生化指标的测定。
然后取6尾鱼的前、中段肠,装入编号后的冻存管中,放入-80℃冰箱待用,用于肠道消化酶指标的测定。另外,每个桶随机选取接*平近**均体重的鱼2尾,称重后用锡箔纸包好放于瓷盘中,然后放到105℃恒温烘箱烘至恒重,用于常规养分含量的测定。

生长及形体指标的计算
生长指标在测定中需要使用以下公式运算:
存活率(rvivalrate,SR,%)=Nt/N0×100。增重率(Weightgainrate,WGR,%)=(Wf-Wi)/Wi×100。特定生长率(Specificgrowthrate,SGR,%)=(lnWf–Wi)/t×100。
饲料系数(Feedcoefficientrate,FCR)=Wr/Wz。肝体比指数(Hepatosomaticindex,HSI,%)=Wg/Wq×100。脏体比指数(Viscerosomaticindex,VSI,%)=Wzz/Wq×100。肥满度(conditionfactor,CF,g/cm3)=Wf/Lb3
上述公式中:初始鱼数尾数用N0来表示;终末鱼数用Nt来表示;平均终末体重用Wf来表示;平均初始体重则使用Wi来表示;t代表饲养的总天数;饵料消耗量使用Wr来代替;Wz表示增加的重量;Wg代表肝脏重(g);Wq为全鱼重(g),Wzz脏体重(g),Lb平均终末体长(cm)。
数据统计分析
试验数据用OfficeExcel和SPSSstatistics25.0软件进行单因素方差分析(one-wayANOVA),结果均以平均值和均值标准误表示,P<0.05为差异显著,P>0.05为差异不显著,若处理间有显著差异,再用Duncan氏法进行多重比较检验。
结果与分析

不同Vc源对罗非鱼生长性能及机体养分的影响
不同Vc源对吉富罗非鱼生长有不同的影响,可以发现锌螯合Vc组的末体重和增重率最高,增重率达到697.09%,与对照组相比具有显著性差异(P<0.05);Vc-磷酸酯组的末体重虽然低于螯合Vc组,但是仍然显著高于对照组(P<0.05);各组的增重率从高到低顺序为:锌螯合Vc组>Vc-磷酸酯组>普通Vc组>对照组。
锌螯合Vc组的特定生长率显著高于对照组和普通Vc组(P<0.05),各组的存活率都在90%以上,差异不显著(P>0.05)。相比对照组和普通Vc组,添加锌螯合Vc组显著降低了饲料系数(P<0.05),Vc-磷酸酯组的饲料系数与各组差异不显著(P>0.05)。 各组间摄食量差异不显著(P>0.05)。

不同Vc源对吉富罗非鱼形体指标的影响。锌螯合Vc组的肝体比指数显著低于Vc-磷酸酯组(P<0.05)。各组间脏体比和肥满度差异不显著(P>0.05)。

不同Vc源对吉富罗非鱼常规养分含量影响。Vc-磷酸酯和锌螯合Vc组的粗灰分含量显著高于对照组和普通Vc组(P<0.05)。各组间水分、粗蛋白均无显著性差异(P>0.05),各Vc组粗脂肪有上升的趋势,但各组间差异不显著(P>0.05)。

不同Vc源对吉富罗非鱼血清生化指标的影响
与对照组相比,添加锌螯合Vc组显著提高T-AOC值(P<0.05)。添加Vc-磷酸酯组的T-SOD活力最低,与对照组、普通Vc组和锌螯合Vc组相比显著降低(P<0.05)。
与对照组对比发现,添加Vc-磷酸酯组显著降低MDA的含量(P<0.05),添加Vc-磷酸酯组、螯合Vc组显著降低COR的含量(P<0.05)。各组T-GSH间均无显著性差异(P>0.05)。

不同Vc源对吉富罗非鱼血清免疫指标的影响。普通Vc组的IgM最低,与对照组和锌螯合Vc组相比具有显著性差异(P<0.05)。锌螯合Vc组的C3、C4最低,与Vc-磷酸酯组相比具有显著性差异(P<0.05)。
普通Vc组的LSZ最高,与对照组、Vc-磷酸酯组和锌螯合Vc组相比具有显著性差异(P<0.05)。与对照组相比,添加Vc-磷酸酯组显著提高AKP活力,而锌螯合Vc组则显著降低AKP活力(P<0.05)。各组ACP间均无显著性差异(P>0.05)。

不同Vc源对吉富罗非鱼肠道消化酶活性的影响
普通Vc组糜蛋白酶活性显著高于对照组和Vc-磷酸酯组(P<0.05),锌螯合Vc组与各组均无显著性差异(P>0.05);对照组脂肪酶活性显著高于Vc-磷酸酯组和锌螯合Vc组(P<0.05),与普通Vc组无显著性差异(P>0.05),Vc-磷酸酯组和锌螯合Vc组差异不显著(P>0.05)。
对照组胰蛋白酶活性显著低于普通Vc组、Vc-磷酸酯组和锌螯合Vc组(P<0.05),各实验组间无显著性差异(P>0.05)。各组间淀粉酶活性均无显著性差异(P>0.05)。
不同Vc源对吉富罗非鱼肝脏生化指标的影响
添加Vc-磷酸酯组T-AOC值最低,与对照组、普通Vc组和锌螯合Vc组相比具有显著性差异(P<0.05)。添加Vc-磷酸酯组MDA含量最低,与对照组、普通Vc组和锌螯合Vc组相比具有显著性差异(P<0.05)。

添加Vc-磷酸酯组的ACP活力与普通Vc组和锌螯合Vc组相比显著升高(P<0.05)。添加锌螯合Vc组的ICDH活力最高,与对照组和普通Vc组相比具有显著性差异(P<0.05)。各组间T-SOD,T-GSH,AKP和6PGDH均无显著性差异(P>0.05)。
不同Vc源对吉富罗非鱼生长性能及体成分的影响
已有很多研究证明,Vc是维持鱼类正常生长发育必需的营养物质,饲料中添加适量的Vc能够促进鱼类生长。
本试验研究结果表明,在饲料中添加锌螯合Vc组较对照组能够显著增加吉富罗非鱼的末体重、增重率和特定生长率,Vc-磷酸酯组的末体重显著高于对照组,普通Vc组的末体重与其它各组均无显著差异。
普通Vc组和Vc-磷酸酯组的增重率与对照组和锌螯合Vc组无显著差异;Vc-磷酸酯组的特定生长率与其它各组均无显著差异,对照组和普通Vc组的特定生长率显著低于锌螯合Vc组;各组间存活率均差异不显著。
这表明,饲料中添加Vc确实能够提高饲料转化率,显著降低饲料系数。

综上可推测不同来源的Vc由于产品自身特性的不同,在鱼类中的应用效果也不尽相同,本试验结果表明,在促进吉富罗非鱼生长效果以添加锌螯合Vc最佳,其次是Vc-磷酸酯,普通Vc最差,这可能是锌螯合Vc经螯合作用后增强了其稳定性,提高饲料转化率高有关。
饲料中添加适量的Vc能够降低异鳃鲇的肥满度和肝体比;本试验研究结果表明,锌螯合Vc组的肝体比显著低于Vc-磷酸酯组,与其它两组差异不显著,脏体比和肥满度各组间均无显著差异。
但在饲料中添加Vc-磷酸酯对吉富罗非鱼和草鱼的肥满度、脏体比和肝体比均无显著影响,与本研究结果基本一致。

这些差异可能跟Vc添加量、鱼类品种等因素有关。研究表明,在饲料中添加Vc对翘嘴鲌的水分、粗蛋白、粗脂肪和灰分均无显著影响[87]。
在饲料中添加Vc-磷酸酯对草鱼肌肉水分、粗蛋白、粗脂肪均无显著影响。在饲料中添加不同水平的Vc-磷酸酯对吉富罗非鱼各组肌肉粗蛋白、粗脂肪和灰分均无显著影响。本试验中,各组水分、粗蛋白、粗脂肪均无显著影响,与上述研究结果基本一致。
Vc-磷酸酯组和锌螯合Vc组的粗灰分显著高于其它两组,这可能与Vc产品中含少量锌有关,其具体原因有待进一步探讨。Vc对鱼类的生长有着重要的作用,缺乏Vc使鱼类会出现生长缓慢、骨骼畸形、表皮出血等症状。
本试验中,对照组鱼并未出现明显缺乏症状,可能是由于基础日粮中含有一定量的Vc,短期能够维持鱼类基本生理需求,但有影响其生长速度。

本试验结果表明,普通Vc组和Vc-磷酸酯组两种Vc源对吉富罗非鱼的生长性能影响不明显,但锌螯合Vc有显著的促生长效果,优于Vc组和Vc-磷酸酯组。
在本试验条件下,综合各项生长指标,锌螯合Vc是吉富罗非鱼Vc的最佳来源。这可能是由于锌螯合Vc比普通Vc和Vc-磷酸酯具有更稳定的特性或者更好的吸收利用途径,但其具体原因尚有待深入研究。
