小反刍兽疫（PPR）通常称为羊瘟，是由于感染小反刍兽疫病毒而引起的一种急性和致死性传染病，感染后发病率100%，严重爆发期致死率达100%。发病动物常表现为眼睛、鼻腔内黏膜卡他性炎症，口炎，支气管肺炎等。小反刍兽疫病毒属副黏病毒科麻疹病毒属，为囊膜的RNA病毒。病毒粒子外观多形性，大多数为粗糙的球形，核衣壳呈螺旋的杆状。该病的唯一自然宿主是山羊和绵羊，山羊比绵羊更容易感染，临床症状更为严重。岩羊、野山羊、盘羊、长角大羚羊、亚洲水牛、骆驼等也可感染发病。人工感染牛呈亚临床感染，能产生抗体。人工感染猪表现亚临床感染，无症状，不排毒。该病主要是消化道和呼吸道传播，该病一年四季均可发生，尤其是在多雨和干燥寒冷的季节更易发病。
1 现行检测诊断标准
表1 小反刍兽疫检测诊断标准（现行）
2 临床症状和病理变化
本病潜伏期短则4～6 d，长则21 d。临床上可分为：1）最急性型，该类型较少发生，主要是幼龄山羊多发，通常在高烧达 42 ℃后1～2 d 内急性死亡。2）急性型，临床上最常见，病羊突然发热，高烧达40.5～41.5℃，精神颓废、食欲废绝、鼻镜干燥、眼结膜潮红充血、呼吸困难、咳嗽，口眼鼻分泌物由浆、液性转为黏性脓液性大量流出，继而在口鼻周围形成结痂，口腔黏膜溃疡、糜烂坏死，恶臭腹泻严重，甚至发生血性腹泻，病羊极度脱水，终因衰竭而亡。3）温和型，与感冒症状类似，部分病羊出现短暂性发烧，大量黏液性或脓性分泌物从眼鼻流出，偶有腹泻发生。温和型病羊大多可耐过，恢复健康。
最为明显的病理变化为结膜炎和坏死性的口炎。发病严重的病例，在咽喉和硬腭等部位也会出现肉眼可见的病变。在上呼吸道黏膜可见大量出血点，还常见有支气管肺炎等病变。其皱胃病变较为明显，表现为糜烂，创面为红色，有出血斑点；而瘤、网、瓣胃通常不出现病变。肠道可见出血性肠炎或者坏死性肠炎病变。盲肠和结肠部位有特征性的条状充血和出血，外观如斑马状条纹，尤其是在结肠和直肠交界处。此外可见淋巴结肿大，特别是肠系膜淋巴结；脾脏肿大和坏死等。
3 检测诊断方法
3.1 病毒分离培养和鉴定
病毒分离：采集眼睑下结膜分泌物和鼻腔分泌物、颊部、直肠黏膜病料拭子，血液，组织脏器，精液等病料。将病料处理后接种细胞，培养。
病毒培养：取经处理过的样品接种到已形成良好单层的羊肾原代细胞或VERO细胞的24孔培养板中。置于37℃吸附1 h，倾去接种液，用维持液洗1～2次，最后加入1 mL维持液。置于37℃二氧化碳培养箱培养，逐日观察细胞变化。收取培养物，保存于-70℃以下待鉴定。
病毒鉴定：如盲传3代后无细胞病变，则为PPR阴性；如病毒在羔羊肾细胞的病变包括细胞变圆，细胞集合，呈葡萄串状、拉网、最后形成合胞体，则为PPR阳性；病毒在VERO上有时很难看到合胞体，则取病变细胞培养物，经冻融裂解两次后，以10 000 r/min离心10 min，取上清液做病毒中和试验，能与小反刍兽疫标准阳性血清中和，使50%以上细胞不出现细胞病变，则为PPR阳性。
3.2 聚合酶链式反应
表2 小反刍兽疫PCR检测引物
结果判定：经PCR扩增反应后，在试验有效的前提下，被检样品PCR产物经电泳后仅在351 bp处出现特异性扩增条带者，则判为PPRV阳性；被检样品PCR产物经电泳后无特异性条带，则判为PPRV阴性。
3.3 荧光定量PCR
表3 小反刍兽疫荧光定量PCR检测引物
结果判定：被检样品经核酸提取和扩增后，标准阳性对照样品有特异性扩增曲线且Ct值≤30，标准阴性对照和空白对照无特异性扩增曲线，则实验成立。样品有特异性扩增曲线且CT值≤40，则判为PPRV阳性；样品CT值＞40或无特异性扩增曲线，则判为PPRV阴性
3.4 抗体ELISA检测
选用小反刍兽疫竞争ELISA检测试剂盒，严格按照商品说明书操作和判断。
3.5 琼脂凝胶免疫扩散试验
取血清样品做被检材料，标准血清、标准抗原和被检材料分别加入琼脂板的孔中，静置10 min，移入湿盒内室温（22～25℃）反应。加样24 h后判定结果。若待检血清与抗原孔之间出现沉淀线，并与阳性对照沉淀线末端相融，则判为PPRV阳性；若待检血清与抗原孔之间未出现的沉淀线，则判为PPRV阴性；若血清孔与抗原孔之间出现沉淀线，判定为非特异性反应，非特异性反应的血清再做一次，结果仍为非特异性反应的判为PPRV阳性。
3.6 胶体金试剂卡检测
选用小反刍兽疫商品化胶体金试剂卡，严格按照商品说明书操作和判断。
4 结语
小反刍兽疫的实验室检测方法有多种，各有优缺点。病原检测中，病毒的分离鉴定是最基本的检测方法，但是比较繁琐，耗时较长，不利于快速诊断；ELISA对小反刍兽疫抗体能起到良好的检测效果，利于随时跟踪检测抗体的消长情况，以便制定合理的免疫程序；PCR和荧光定量PCR都是进行大批量检测抗原的常用方法，但相比之下，荧光定量PCR检测抗原更精确、更快速、更便捷，是净化工作的最佳选择。
参考文献
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