Flowjo之周期数据知多少?
小橙子:罗工您好,我又来咨询流式问题啦。是这样的,我刚刚做了周期实验,数据也导出来了,怎么用flowjo分析这个周期数据啊?
罗工:小橙子你好呀,上次的实验优化之后结果怎么样啊?下面就来和你聊一下用flowjo如何分析周期数据。
小橙子:上次优化后结果很好,这不又来请教问题啦。
罗工:用flowjo分析周期数据,其实也不是特别难,正常的流程就是我们要把数据拖入flowjo分析数据模块,进行圈目的细胞。 如下图。

接着去除黏连体,根据经验所得,在去除黏连体的时候最好用通道的A和W,这样拟合出来的周期曲线会好很多。如下图

最后点击拟合周期小图标就可以拟合出来周期曲线啦,如下图
。

小橙子:谢谢罗工,我自己刚才按照你这个流程拟合出来了周期曲线,但是我如何进行解读呢?
罗工:拟合周期曲线之后,下面会有对应的数据,如下

如图所示,理论上模型曲线和样本曲线拟合越一致越好。周期拟合结果的好坏还可以通过RMS值进行判定。RMS值越小表明拟合结果越好。RMS没有确定的范围,是一个相对值,比如图拟合结果对应的RMS值为2.86,结果较好。拟合较差时,可以尝试更改拟合模型。
还有就是CV值也就是变异系数, CV值主要受仪器灵敏度、样本制备和染色过程的影响(比如参数设定和固定时间)。CV值越小,峰型越窄、越尖锐。CV值设定在5左右比较理想,一般大于10则对结果不认可。一般采用G0/G1期CV值用于判定结果的精度(分辨率)。 CV值限定也有两种方法:①理论上,G1CV=G2CV或者G2CV=G1CV,可以根据这一原则对CV值进行限定。②手动输入固定的CV值,一般建议参考整组样本中拟合最佳样本的CV值进行设定,同一组样本的CV值变化很小。 如图

那么一整个flowjo分析周期数据的流程就这些。希望这次的咨询对你也有帮助哈。
小橙子:谢谢罗工,很详细。有什么不懂的再来请教哦,再次感谢。