应用编号：AP10513
氮杂红霉素的分析方法
应用及技术服务部
天津博纳艾杰尔科技有限公司，天津开发区西区南大街179号，300462
概述
本实验使用Durashell C18（L），5μm，4.6×250mm色谱柱对氮杂红霉素有关物质进行测试，实验结果表明，有关物质供试品溶液中主峰与相邻杂质可实现有效分离，满足实验要求。
关键词
氮杂红霉素；Durashell C18（L）；
化合物信息
表1. 化合物信息
实验部分
3.1仪器、试剂与材料
3.1.1主要仪器设备
SHIMADZU LC-20A高效液相色谱仪；
3.1.2试剂材料
微孔滤膜：0.22 μm尼龙滤膜；
实验用水为屈臣氏蒸馏水；
无水磷酸氢二钠、磷酸二氢铵为分析纯试剂；
甲醇、*腈乙**、磷酸为色谱纯试剂；
磷酸盐缓冲液（取无水磷酸氢二钠1.8g，加水溶解并稀释至1000mL，磷酸调节pH值至8.9）
溶剂：1.73g/L磷酸二氢铵（*水氨**调节pH值至10.0）-*腈乙**-甲醇=7:6:7；
3.1.3样品
取本品约0.1g，置25mL容量瓶中，加甲醇5mL溶解，用溶剂稀释至刻度，摇匀，经微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。
3.3仪器检测条件
3.3.1色谱条件
色谱柱：Durashell C18（L）；（4.6×250mm, 4μm,）；P/N:DC952505-L；
流动相A：磷酸盐缓冲液；
流动相B：甲醇-*腈乙**=25:75；
流 速：1.0 mL/min；
柱 温：40 ℃；
波 长：210nm；
进样量：20 μL；
表2. 梯度程序
|
时间/min |
流动相A% |
流动相B% |
|
0 |
50 |
50 |
|
25 |
45 |
55 |
|
30 |
40 |
60 |
|
80 |
25 |
75 |
|
81 |
50 |
50 |
|
93 |
50 |
50 |
3.4结果
表3.实验结果
|
化合物 |
保留时间 /min |
理论塔板数 |
拖尾因子 |
分离度 |
|
氮杂红霉素 |
41.853 |
18108 |
3.65 |
— |
|
未知杂质 |
44.139 |
36377 |
— |
2.17 |
3.5实验谱图
图1. 供试品溶液色谱图
结论
本实验使用Durashell C18（L），5μm，4.6×250mm色谱柱对氮杂红霉素有关物质进行测试，实验结果表明，有关物质供试品溶液中主峰与相邻杂质可实现有效分离，满足实验要求。