蛋白质印迹技术原理 (蛋白印迹技术)

westernblot怎么提取蛋白,westernblot测定蛋白质溶解度

蛋白质印迹技术(免疫印迹实验)又称为Western Blot。它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。Western Blot主要用于检测或分析蛋白,应用领域集中在基因表达研究、抗体活性检测和疾病诊断等。

01 蛋白质印迹基本流程图

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02 western blot步骤

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蛋白转印使用天能VE-586转移电泳槽主要优势在于:它可以在不埋冰的情况完成的蛋白电泳,如果配合快速转膜液,整个电泳过程只需不到30分钟,可同时转印4块胶,操作方法也比较简便。在缩短转印时间的同时,实现了蛋白样品的高效转印。 03 蛋白电泳 目前常用的是SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳),蛋白质会根据分子量大小分开,分子量的蛋白会留在胶的下部,分子量大的会在胶的顶部。

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04 转膜 转膜主要是将蛋白质从凝胶转移到膜上,常用的是NC膜和PVDF(聚偏氟乙烯),由于膜与蛋白质高度亲和的能力,所以更容易与蛋白结合。为了便于观察电泳效果和转膜效果,可以使用蛋白预染Marker,以方便判断蛋白分子量大小。

昆明纳瑞科技提供 天能VE-586 以及相应的配件等

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昆明纳瑞科技提供转膜过程需要的多种产品,详情如下:

同时转印 四块凝胶

时间节约一半

效率大大提高

最关键的是 安全

性能特点

  • 可同时转印四块9×9cm凝胶
  • 转印时间为15-60min
  • 槽体高强度,免除液体渗漏的困扰
  • 专用开启式转移胶架,操作方便
  • 多重安全设计,解决操作安全问题

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06 ECL化学发光反应: 在工作台上铺一张保鲜膜,将PVDF膜置于保鲜膜上。将ECL的A和B两种试剂在EP管内等体积混合(注意吸完A试剂后吸B试剂前要更换枪头),然后均匀滴在PVDF膜的蛋白面,反应1~2min后,将PVDF膜上多余的ECL发光液吸干,进行固定。

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07凝胶图象分析 将胶片进行扫描或拍照,使用凝胶成像仪进行成像分析。

对于转膜有很多的方法,常见的有干转和湿转。

但是转印的时间都是很久的,而且一次性转印的数量也是有限的,多则4小时,少则两小时,现在有一个神奇的设备可以快速高效的完成Western Blot的蛋白转膜。

那么如何解决这个难题:

天能VE-586

同时转印 四块凝胶

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