2月22日，中国婴幼儿配方奶粉的新国标正式实施，对比旧国标，这份被称为“史上最严格”标准的婴幼儿配方奶粉标准在配方标准上提出了更高的要求。在经历了两年的过渡期后，新标准调整了蛋白质、脂肪、维生素和矿物质中的多个指标，同时更新了检测方法。
艾杰尔飞诺美婴幼儿配方奶粉分析解决方案
应用一 婴幼儿配方奶粉中的维生素E检测
GB 5009.82新版征求意见稿《食品中维生素A和E的测定》中，第一法反相高效液相色谱法分析了A顺反式（全反式视黄醇、13-顺式视黄醇）、维生素E的生育酚异构体（α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚、α-生育三烯酚）等目标物。
艾杰尔飞诺美选用Kinetex F5成功分离了维生素E的5种生育酚异构体，30分钟内即可完成分析，而且比国标分离度有改善。Kinetex F5五氟苯基基团可以提供包括疏水性作用，π- π相互作用，偶极矩作用，以及氢键等不同的相互作用，所以在异构体分析上有优异表现。
Kinetex F5
- 重现性高的五氟苯基固定相
- 适合卤代化合物、共轭化合物、异构或强极性化合物分析
- 100%水溶液稳定
pH范围：1.5-8.5
USP分类：L43
孔径：100Å
|
药物分析 |
氯酚取代物，类固醇混合，甲氧基苯取代物，阿片类药物,邻苯二甲酸酯，苯二氮卓，几何异构体,止痛药物组合，抗生素LC-MS筛选等 |
|
中药/天然产物 |
紫杉醇，茶多酚，东莨菪碱等 |
|
食品/环境 |
氯化农药筛查，兽残等 |
色谱条件
色谱柱： Kinetex F5 4.6×250mm 5μm
P/N： 00G-4724-E0
流动相：
A：水
B：甲醇
流速： 0.8mL/min
柱温： 25℃
波长： 294nm
进样量： 20μL
梯度程序见表1：
表1. 梯度条件
|
时间 (min) |
流速 (mL/min) |
A (%) |
B (%) |
|
0 |
0.8 |
15 |
85 |
|
30.0 |
0.8 |
7 |
93 |
|
32.0 |
0.8 |
5 |
95 |
|
34.0 |
0.8 |
5 |
95 |
|
34.1 |
0.8 |
15 |
85 |
|
40.0 |
0.8 |
15 |
85 |
图1. 5种维生素E色谱图294nm
表2. 5种维生素E出峰情况
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化合物 |
保留时间 /min |
拖尾因子 |
分离度 |
|
α-生育三烯酚 |
18.331 |
0.95 |
— |
|
δ-生育酚 |
20.453 |
0.96 |
5.75 |
|
γ-生育酚 |
23.461 |
0.94 |
7.95 |
|
β-生育酚 |
24.126 |
0.95 |
1.71 |
|
α-生育酚 |
26.661 |
0.93 |
6.32 |
GB 5009.82新版征求意见稿《食品中维生素A和E的测定》中，第三法分析了食品中d-α-生育酚与dl-α-生育酚。艾杰尔飞诺美选用Lux Cellulose-1，在反相条件下成功分离同分异构体dl-α-生育酚，同时通过优化流动相条件，比国标分离度有改善。测试实际样品时，建议配置配套的保护柱使用，可以延长色谱柱的使用寿命。
液相条件：
色谱柱: Lux™ 5µm Cellulose-1
（Size: 4.6×250mm, P/N: 00G-4459-E0）
保护柱套: P/N: KJ0-4282
保护柱芯: P/N: AJ0-8403
流动相: *腈乙**：水=83: 17（v/v）
流速: 1.0mL/min
进样量: 10µL
波长: PDA 294nm
温度: 25℃
图2. d-α-生育酚测试谱图
表3. d-α-生育酚分析结果
|
化合物 |
保留 时间 |
柱效 |
拖尾 |
峰面积 |
|
d-α-生育酚 |
16.658 |
7815 |
0.986 |
3879239 |
图3. dl-α-生育酚测试谱图
（dl-α-生育酚组分峰1；dl-α-生育酚组分峰2）
表4. dl-α-生育酚分析结果
|
化合物 |
保留 时间 |
柱效 |
拖尾 |
峰面积 |
含量% |
分离度 |
|
1 |
16.631 |
6194 |
0.981 |
3611749 |
50.2 |
- |
|
2 |
18.936 |
5285 |
0.969 |
3589712 |
49.8 |
2.4 |
应用二 婴幼儿配方奶粉中的维生素B1检测
图4. 婴幼儿配方奶粉中的维生素B1
液相条件 ：
色谱柱：Venusil® XBP C18(2)，4.6×250mm，
100Å，5μm（P/N:VX952505-2）
流动相：0.05mol/L 乙酸钠溶液︰甲醇= 65︰35
荧光检测器检测波长：激发波长375nm，发射波长435nm
流速：1.0mL/min
进样量：10μL
应用三 婴幼儿配方奶粉中的维生素B2检测
图5. 婴幼儿配方奶粉中的维生素B2
液相条件 ：
色谱柱：Venusil® XBP C18(2)，4.6×150mm，
100Å ，5μm（P/N:VX951505-2）
流动相：0.05mol/L 乙酸钠溶液︰甲醇= 65︰35
荧光检测器检测波长：激发波长462nm，发射波长522nm
流速：1.0mL/min
进样量：10μL
应用四 婴幼儿配方奶粉中的维生素B6测定
图6. 婴幼儿配方奶粉中的维生素B6
液相条件 ：
色谱柱：Venusil® XBP C18(2)，4.6×150mm，100Å，5μm（P/N:VX952505-2）
流动相：甲醇50mL，辛烷磺酸钠2.0g，三乙胺2.5mL，水定容至1000mL，冰乙酸调pH为3.0±0.1
荧光检测器检测波长：激发波长293nm，发射波长395nm
流速：1.0mL/min
进样量：10μL
应用五 婴幼儿配方奶粉中的烟酸的测定
图7. 婴幼儿配方奶粉中的烟酸
液相条件 ：
色谱柱：Venusil® XBP C18(2)，4.6×250 mm，100Å，5μm（P/N:VX952505-2）
流动相：甲醇70mL，异丙醇20mL，庚烷磺酸钠1g，用910mL水溶解并混匀后，用高氯酸调pH至2.1±0.1，经0.45μm微孔滤膜过滤
紫外检测器检测波长：261nm
流速：1.0mL/min
进样量：10μL
应用六 婴幼儿配方奶粉中的牛磺酸的测定
图8. 婴幼儿配方奶粉中的牛磺酸
液相条件：
液相色谱柱：Venusil® XBP C18(2)，4.6×250mm，100Å，5μm（P/N:VX952505-2）
流动相：10mM
乙酸钠缓冲溶液（pH为4.2）︰*腈乙**=70︰30（V/V）
波长：254nm
流速：1.0mL/min
进样量：20μL
应用七 婴幼儿配方奶粉中5种核苷酸的测定
图9 5种核苷酸混标高效液相色谱图
色谱条件：
色谱柱：Venusil® C18 Plus；5μm，120Å，4.6×250mm；（P/N:VPS952505-A）
流动相：称取1.360g磷酸二氢钾，加0.4753g四丁基硫酸氢铵至1000mL容量瓶中，用水补齐至刻度，准确加2.5ml磷酸和40mL甲醇，混匀后超声10min
（备注：由于流动相中含离子对试剂，色谱柱需要先用流动相平衡至少90min后，再运行4针标准品，系统才能稳定）
波长：254nm
柱温：30℃
流速：1.0mL/min
进样量：10μL
应用八 婴幼儿配方奶粉中抗坏血酸的测定
图10. L (+)-抗坏血酸和D (+)-抗坏血酸50 μg/mL标准溶液液相色谱图
液相条件 ：
色谱柱：Venusil® C18 Plus，5μm，120Å，4.6×250mm（P/N:VPS952505-A）
流动相：
A: 6.8g磷酸二氢钾，用水溶解并定容至1L (用磷酸调pH 至2.5 ~ 2.8)
B:100%甲醇
按A∶B=98∶2混合，过0.45 μm 滤膜，超声脱气
流速：0.7mL/min
柱温：25℃
进样量：20μL
检测波长：245nm
应用九 婴幼儿配方奶粉中维生素K1的测定
图11. 奶粉样品维生素K1色谱图
液相条件：
色谱柱：Venusil® C18 Plus，5μm，120Å，4.6×250mm （P/N:VPS952505-A）
锌还原柱：粒径50~70μm，柱长50mm，
内径4.6mm；（P/N:VZN9600505-0）
流动相：甲醇900mL，四氢呋喃100mL，冰乙酸0.3mL，混匀后，加入氯化锌1.5g无水乙酸钠0.5g，超声溶解后，用0.22μm有机系滤膜过滤
流速：1mL/min
柱温：30℃
进样量：10μL
检测波长：激发波长243nm，发射波长430nm
伴随着新标准的正式实施发布，艾杰尔-飞诺美为乳品厂商及各级检测实验室提供更加精准、可靠、高效的检测分析手段和解决方案，确保食品乳制品检测分析有序运行。