MET基因介绍
肺癌是全世界最常见的癌症类型，全球每年新发200万例左右。同时，肺癌也是癌症相关死亡的主要原因，全世界每年有170万例死亡病例。包括MET ex14跳跃改变、MET扩增以及MET蛋白过度表达在内的MET信号通路改变发生在3％-5％的NSCLC病例中。
2007年MET扩增被发现，如今已然成为EGFR-TKI的重要耐药机制之一，c-Met通路在非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）中的研究也逐渐成为一个热点。MET基因位于人类7号染色体长臂（7q21-31），长度约125 kb，同时含有21个外显子。c-MET是MET基因编码产生的具有自主磷酸化活性的跨膜受体，属于酪氨酸激酶受体（receptor tyrosine kinases, RTKs）超家族，主要表达于上皮细胞。HGF是目前发现的c-MET的唯一配体，属于纤维蛋白溶酶原家族，主要表达于间质细胞，亦可表达于肿瘤细胞而通过自分泌机制发挥作用。HGF与c-MET的Sema域结合使c-MET发生二聚、酪氨酸磷酸化，继而激活众多下游信号通路，如PI3K-Akt、Ras-MAPK、STAT和Wnt/β-catenin等，从而发挥其促细胞增殖、细胞生长、细胞迁移、侵袭血管及血管生成等效应，在组织正常发育和肿瘤进展中发挥关键作用。
MET基因结构（红色框（编码细胞外结构域的外显子），蓝色框（编码细胞内部分的序列）和绿色框（编码跨膜结
MET基因与NSCLC
c-MET是一种原癌基因，也是多种癌症的驱动基因之一。c-MET激活方式有点突变、扩增、蛋白过表达和重排四种类型，其中重排被认为是一种新的致癌方式。2015年ASCO大会上报道了关于c-MET基因突变的研究，指出它在肺腺癌中发生率为3%，其最常见的变异类型是外显子14的供体位点剪接突变。
MET基因变异示意图
目前临床病理特征的研究显示，MET 14外显子跳跃突变于NSCLC中以肺肉瘤样癌和腺癌最为多见。
研究发现HGF/c-Met信号通路异常激活与吉非替尼、厄洛替尼等小分子EGFR-TKI耐药有关。HGF/c-Met信号通路的异常激活，主要机制涉及HGF及相应受体c-Met过表达、c-Met基因扩增和c-Met基因突变。其中，HGF过表达和c-Met基因扩增为其主要原因。c-MET扩增在一线初治时突变频率约2~4%，二线耐药时MET扩增约在4~10%左右，在奥希替尼二线治疗的耐药机制约中占20%，奥希替尼一线治疗中MET扩增是最常见耐药机制约占15%。
非小细胞肺癌中MET扩增频率
MET基因变异检测方法
1）MET 14外显子跳跃突变
MET 突变以14外显子跳跃突变为主，且MET 14外显子跳跃突变形式多样，目前以DNA为基础的NGS是最常用检测技术。目前国内批准的肺癌诊断的NGS试剂盒逐渐增多，其中还只有艾德生物的试剂盒是包含MET基因的检测，其基于PCR方法的试剂盒可检测14外显子跳跃突变；基于 NGS的10基因试剂盒可以检测13~14外显子以及内含子，以及 Ex15~20。另外，MET 14外显子跳跃突变常伴有免疫组化（immunohistochemistry, IHC）下的MET过表达。因此，也有研究者建议可以先用IHC对患者进行筛选，从而缩小目标人群。
2）MET扩增
MET扩增即MET拷贝数扩增，包括整体染色体重复和局部区域基因的重复。整体染色体重复即多倍体（polysomy），肿瘤细胞中出现多条7号染色体。通常使用荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization, FISH）检测MET拷贝数扩增。FISH法可通过检测MET位点和CEP7（作为对照）来判定MET基因拷贝数（MET gene copies number, MET GCN），其评估标准可依据两个方面：①MET/CEP7的比值; ②每一个细胞的基因拷贝数量及其阳性细胞所占总细胞比例。对于FISH诊断MET扩增还没有统一的标准，常用的有Cappuzzo评价系统和PathVysion两种方法。另外，随着高通量测序大panel试剂盒的批准，MET扩增也可以用NGS的方法进行检测。
检测MET扩增
FISH检测MET扩增的评价标准
NGS检测MET扩增
在TATTON 1b 期的研究中，对于MET基因扩增的检测方法主要有：
1，荧光原位杂交（FISH）：MET基因拷贝≥5 或 MET：EP7≥2；
2，NGS方法检测：≥20％肿瘤细胞，≥200x测序覆盖深度，≥1.8 Log2 比率，假设50％肿瘤分数；
3，免疫组织化学（IHC）：≥50％的肿瘤细胞是3+。
MET变异三种检测方法的比较
3）MET蛋白过表达
IHC可用于检测c-MET蛋白的过表达情况。MET IHC以抗-c-MET（SP44）兔单克隆抗体（#7904430, Ventana Medical Systems, Tucson, AZ）为一抗，以抗-Rb OmniMap DAB（#760149, Ventana Medical Systems）为二抗，阳性标准以两种不同的方法判定：①H-评分，这一评分根据样本的染色强度（0-4）和阳性肿瘤细胞所占细胞总数的比例（0-100%）而判定，其分数为0-400不等，只要H-评分大于200便可判定为阳性; ②将肿瘤细胞分为MET高表达和低表达两类，其具体判定标准为：3+（≥50%的肿瘤细胞呈强阳性）; 2+（≥50%的肿瘤细胞呈阳性/弱阳性且 < 50%的肿瘤细胞呈强阳性）; 1+（≥50%的肿瘤细胞呈弱阳性且阳性细胞数 < 50%）; 0（无染色或任何强度染色的肿瘤细胞数均 < 50%）; 2+或3+被定义为MET高表达，0或1+被定义为MET低表达（Metmab标准）。有学者提出，由于在临床上用IHC的方法检测的是c-MET总蛋白的表达量，而MET蛋白只有在被异常激活以后才会通过激活下游通路在NSCLC的发生发展中起作用，故通过IHC的方法分析MET蛋白的磷酸化状态比单纯检测MET蛋白表达量更适合选择c-MET靶向治疗的人群。所以在应用IHC方法时，需注意MET蛋白表达量界限的判定标准，并确定是否需要检测其磷酸化的状态; 另外，H-评分和Metmab标准在MET IHC中应用前景的比较也许需研究探讨。
通过上述对基因突变、基因扩增和蛋白过表达三种相应检测方法的描述，似乎可以看出检测基因突变和基因扩增的特异性较蛋白表达更好，而IHC法灵敏度更高，对于最佳方法及其判定标准的选择，还需进一步明确基因突变、扩增以及蛋白过表达之间的具体联系及其和肿瘤细胞生长的关系等等。
全球首个选择性MET*制剂抑**获批用于肺癌患者
2020年3月25日，默克公司宣布日本厚生劳动省（MHLW）批准其靶向药物Tepotinib上市销售，用于治疗不可切除、MET外显子14（MET ex14）跳跃突变的晚期或复发性非小细胞肺癌（NSCLC）患者。
Tepotinib是全球首个获批准用于治疗晚期NSCLC MET ex14跳跃突变患者的MET*制剂抑**。
本次获批基于正在进行的单臂II期VISION研究（NCT02864992）的数据。该研究共入组了99例NSCLC患者（包括15例日本患者），以上患者采用液体活检（LBx）或组织活检（TBx）检测证实为携带MET ex14跳跃改变。
根据独立评审委员会（IRC）评估，Tepotinib治疗的客观缓解率（ORR）为42.4%（95%CI 32.5-52.8）；在经LBx、TBx检测的患者中，中位缓解持续时间（DOR）均为12.4个月[经LBx检测：95%CI 8.4个月-不可评估（NE：not evaluable）；经TBx检测：95%CI 9.7个月-NE]。
此外，在对130例患者的安全性分析中，Tepotinib具有良好的耐受性。在任何级别中，最常见的与治疗相关不良事件（TRAE）是周围水肿（53.8％）、恶心（23.8％）和腹泻（20.8％）。TRAE导致11例患者永久性停药（8.5％）。
Tepotinib分子式
Tepotinib是全球首个获批的选择性MET*制剂抑**
此前没有单独靶点的MET*制剂抑**上市，但有两款多激酶包含c-MET靶点的*制剂抑**获批，分别是克唑替尼（靶向ALK、ROS1、MET），和卡博替尼（抑制VEGFR2、RET、MET、Kit等至少9个靶点）。
诺华的Capmatinib和德国默克的Tepotinib，相继在去年9月份获得美国食品药品监督管理局（FDA）授予的突破性疗法，用于针对MET 14号外显子跳跃突变的NSCLC患者的治疗。本次Tepotinib在日本获批，先下一城。
但在c-MET抑制跑道上的角逐才刚刚开始。同样被FDA授予的突破性疗法Capmatinib不容小觑，GEOMETRY mono -1 II期研究的结果显示：一线、二线治疗总体缓解率分别为67.9％和40.6％。并且，Capmatinib在一线治疗中的平均DOR为11.14个月，二线治疗为9.72个月。
我国也有多款在研MET*制剂抑**
我国研发的MET*制剂抑**包括和黄医药的沃利替尼、海和生物的谷美替尼、浦润奥生物的伯瑞替尼、贝达药业引进的EGFR/c-MET双抗MCLA-129、江苏豪森的HS-10241、恒瑞医药的c-MET ADC以及复宏汉霖的c-MET单抗HLX55等。随着相关研究结果的公布，未来将给NSCLC患者提供更多的治疗选择。
参考资料：
1.https://www.prnewswire.com/news-releases/tepmetko-tepotinib-approved-in-japan-for-advanced-nsclc-with-metex14-skipping-alterations-301029496.html
2.https://www.merckgroup.com/en/news/tepotinib-breakthrough-therapy-designation-11-09-2019.html
3.TEPMETKO (Tepotinib) Approved in Japan for Advanced NSCLC with METex14 Skipping Alterations