1. 采集样本后提取RNA
2. 反转录成cDNA
3. PCR扩增
² 模板是核壳蛋白N基因区域（99bp）
² 荧光探针两端连接荧光基团FAM和猝灭基团TAMRA
² 扩增过程FAM与TAMRA解离即产生荧光，PCR仪器可实时监测记录
4. 结果分析
² 以第3到15个循环的荧光信号强度的标准偏差的十倍设定为荧光信号的阈值，阈值线与扩增曲线产生交点，交点对应的横坐标为Ct值。
² Ct值表示荧光信号强度达到阈值时所经历的循环数。
² Ct值小于37 阳性⚑ 37～40可疑，建议重复实验 ⚑大于40 阴性
5. 补充 ：
² 通常所说的RT-PCR指反转录PCR(Reverse Transcription PCR) ，不涉及样本定量。
² 实时定量PCR（Real Time PCR）可用quantitative PCR（qPCR）表示，可用SYBR GREEN染料法和上述的荧光探针法进行荧光定量。