免疫亲和柱荧光光度法(IAC)。 免疫亲和柱荧光光度法是以利用单克隆抗体与抗原发生特异性结合的原理设计的免疫亲和柱为分离手段,以荧光光度计为检测器的快速分析方法。该方法工作原理是将特异性单克隆抗体与载体蛋白偶联,偶联物填柱形成免疫亲和柱(immunoaffinity column,IAC)。IAC 与AFT 可发生特异性吸附。当样品通过柱子时,IAC 吸附AFT,杂质不被吸附而流出柱子,然后用洗脱液洗出AFT,用荧光光度计检测其含量。
IAC的优点是自动化程度高,避免了薄层层析法、高效液相色谱法和微柱法等在操作过程中使用的多种有毒有机溶剂从而减少和避免了对操作人员和环境的危害,此外,所需仪器设备轻巧简捷容易携带,操作简单,耗时短,灵敏度可达1 μg/mL。目前该方法已研发出快速检测装置,检测一个样品只需10~15 min。使用该法测得的是AFT 总量,检测的最高浓度为300 μg/kg。
免疫层析法免疫层析法(immunochromatography,IC) 是将固相膜特定的一端浸入样品中,样品利用毛细管作用在固相膜上泳动,其中的抗原(待测物)与膜上特定区域的抗体(配体)结合,通过可直接肉眼观察的着色标记物或酶促反应显色来确定待测物的有无或多少,10 min内即可获得结果。该方法操作简单,即使不经过培训的人员也可以进行操作;且其快速、不需要复杂或大型的仪器设备,当进行现场测试和大量样品的检测时,极其适用。胶体金、乳胶颗粒、脂质体以及胶体硒等是免疫层析法快速测定样品中AFT常使用的着色标记物。层析时,当样品泳动至固定有配体的区域时,待测物被捕获,并与标记物结合而显色,以固相膜上显色条的有无和多少来定性和定量。目前在我国,基于免疫层析法研发的金标试纸条检测限为5 ppb,准确率大于95 %。