慢病毒滴度检测采用稀释计数测定法
滴度单位： TU/mL ，指每毫升中含有的具有生物活性的病毒颗粒数。“ TU ”为“ transducing units ”的缩写，中文为“转导单位”，表示可以感染并进入到靶细胞中的病毒基因组数。
I. 细胞准备
将生长状态良好的 293T 细胞消化计数后稀释至 1x10^5/mL, 加入 96 孔板， 100 μL/ 孔，为每个病毒准备 6 个 孔。放入 37°C ， 5 % CO2 培养箱中培养。
II. 加病毒
第二天，准备 6 个 1.5 mL EP 管，第一个 EP 管中加入 10 μL 病毒原液，然后做 3 倍梯度稀释，共 6 个稀释度。
III. 追加培养液
第三天，有需要加 puromycin 筛选的孔，先吸去 100 μL 含病毒培养基，加入 100 μL 含 1.5 μg/mL puromycin 的 10 % FBS 完全培养基。
IV. 观察结果并计算滴度
第五天，在荧光显微镜下观察结果，在观察结果前 6 h 需更换新鲜 10 % FBS 完全培养基，从孔中吸出 80 μL 培养基，然后加入 80 μL 新鲜 10 % FBS 完全培养基，放入 37°C ， 5 % CO2 培养箱中培养。 6 h 后荧光显微镜下观察结果，荧光或活细胞 百分比在 10~50 % 的孔计算病毒滴度。
滴度（ TU/mL ） = 细胞数 × 阳性克隆 百分比 ×MOI× 病毒稀释倍数 ×10^3 TU/mL
常见问题解析：
Q1 ： protocol 中使用抗生素筛选法 计算滴度需要注意什么 ？
A1 ：抗生素浓度需要预先做实验摸好浓度，选择最低的能够 100% 杀光所有细胞的浓度。对于常见的 Puromycin 来说，测量的时间点是加药 2-3 天后， Hygromycin 是加药 4-5 天后。
Q2 ：稀释计数测定法与 PCR 法测定病毒核酸量， ELISA 法测定病毒外壳蛋白量最大的区别在于？
A2 ：后两种方法没有考虑慢病毒的活性，死病毒会一并被测出来。
Q3 ：抗生素筛选法和荧光报告基因法有很大的区别吗？
A3 ：从原理上来说，两种方法并没有本质上的区别：它们都是计算阳性细胞的比例，从而换算原始的病毒活性滴度。但是，若细胞培养的时间较长，阳性细胞比例的变异度就会增大。
荧光报告基因法的实验流程较短，在感染 48~72 小时后，待荧光基因充分表达，即可测定。 然而，抗生素法则需要等抗性基因充分表达后，再加入抗生素筛选数天，待彻底杀灭阴性细胞后，才能进行细胞计数并换算滴度。