丁酸梭菌（Clostridium butyricum）又名酪酸菌，它是梭状芽孢菌属中的一个种，存在于土壤，人和动物粪便中，是一种专性厌氧的革兰氏阳性芽孢杆菌，两端钝圆，细菌呈直杆状或稍有弯曲，单个或成对，短链，偶见有丝状菌体，周身鞭毛，能运动。丁酸梭菌能产生丁酸、乳酸等，促进双歧杆菌、乳酸菌等肠道有益菌群增殖，抑制葡萄球菌、大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、产膜梭菌等致病菌和腐败菌的生长，能促进肠道微生物平衡，降低胺类、吲哚、硫化氢等有害物质的产生。丁酸梭菌及其代谢产物能提高饲料利用率和改善畜禽肉质，增强畜禽免疫力和抗病力。
由于丁酸梭菌属于厌氧菌，在工业生产和菌落计数当中都采用厌氧培养的方式，然而丁酸梭菌在厌氧发酵过程中产生大量的气体，特别是在菌落计数中丁酸梭菌产生的气体常常会涨破培养基，影响菌落计数的结果。本试验利用新的培养基和新的涂布方法，对原方法进行改进，避免产气对计数结果的影响，提高菌落计数的准确性。
试验材料和方法
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试验菌株和培养基
丁酸梭菌（由根源公司提供）；GAM营养肉汤加15~20%的琼脂粉和0.05‰溴甲酚紫（指示剂）；胰胨-亚硫酸盐-环丝氨酸琼脂基础（TSC）培养基；PBS缓冲溶液（0.8%NaCl，0.02%KH2PO4，0.115%Na2HPO4，调pH值为7.20）
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样品的制备
样品的制备过程均应遵循无菌操作程序。
液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后用无菌吸管吸取10 mL加入装有90 mLPBS缓冲溶液的250 mL的无菌三角瓶中（瓶内放置适当数量的玻璃珠），180 rpm，30 min振荡混匀，制成1:10的样品匀液。
粉末固体样品：称取1.0000 g固体样品，加入装有100 mLPBS缓冲溶液的250 mL的无菌三角瓶中（瓶内放置适当数量的玻璃珠），180 rpm，30 min振荡混匀，制成1:100的样品匀液。
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试验操作步骤
1）用 1 mL 微量移液器吸头吸取 1:10 或1:100样品匀液 1 mL，沿管壁缓慢注于装有 9 mL PBS缓冲溶液的无菌试管中（注意尖端不要触及稀释液），将试管用涡旋混合器混合30 s，制成 1:100 或1：1000的样品匀液。
2）另取 1 mL 微量移液器吸头，按上述操作顺序，做 10 倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次 1 mL 灭菌吸头。
3）选择 2 -3 个连续的适宜稀释度，试验操作参照下面“原计数方法和新计数方法的比较”。
4）可用肉眼观察，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-forming units，CFU）表示。 选取菌落数在 30 CFU～300 CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数（称重取样以 CFU/g 为单位报告，体积取样以 CFU/mL 为单位报告）。
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原计数方法和新计数方法的比较
原计数方法：选择2-3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取1 mL 样品匀液与熔化好的保持在40~50℃左右的营养琼脂培养基充分混合，然后把这混合液倾注到无菌的培养皿中，待凝固之后，把这平板倒置在恒箱中培养24 h。
新计数方法：选择2-3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取 0.1 mL 样品匀液分别置于TSC琼脂平板，使用 L 形棒进行表面涂布，待表层干燥后，继续倾注入上述培养基，待其全部凝固后，严格厌氧环境下37℃，培养24 h。
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测定指标
菌落生长情况通过图片展示。
结果与分析
图1 原计数方法（左）和新计数方法（右）的比较
原计数方法和新计数方法的比较如图1所示：左边图片培养基被涨破，丁酸梭菌呈乳白色点状分布，右边图片培养基完整，丁酸梭菌呈圆形、黑色菌落。
讨论与结论
与原计数方法相比，新计数方法培养基完整，丁酸梭菌呈圆形、黑色菌落。
作者：王政
