探究罗伊氏乳杆菌在增强肉鸡肠道中粘膜屏障功能的效果
肉鸡养殖是全球重要的畜牧业产业之一，肠道健康在肉鸡的生产性能和养殖效益中具有关键作用，研究表明，经过罗伊氏乳杆菌处理后，肉鸡肠道粘膜的形态结构可能发生改变，可能观察到肠绒毛的长度、密度以及粘膜层的完整性发生变化，这可能表明罗伊氏乳杆菌对肠道粘膜的维持和修复可能产生积极影响。
实验1针对日龄较小的雄性肉鸡进行了分组，分为四组：不施用LR和不刺激k-ST的组，不施用LR但刺激k-ST的组，施用LR但不刺激k-ST的组以及同时施用LR和刺激k-ST的组，每组共有8只雏鸡，这些雏鸡在一个23小时光照/1小时黑暗的照明时间表下保持，自由进食商业入门饲料和饮水。
其中商业饲料含有两种抗生素，在连续7天的每天早上，雏鸡口服300 μL灭菌水，同时口服或不口服1×108活罗伊氏乳杆菌，在第7天，雏鸡接受100 μL灭菌PBS/每克体重的心内注射，同时心内注射或不心内注射1×108k-ST的乳杆菌。
通过一氧化碳安乐死法对雏鸡进行了安乐死，注射后3小时收集回肠和盲肠样本，制备用于总RNA提取的石蜡切片，初步实验表明，口服k-ST不会引发肠道免疫反应，因此在本研究中采用了心内注射的方式来模拟通过血流感染k-ST。
实验2则针对日龄较小的雌性肉鸡展开，分为四组，并在与实验1相同的条件下进行，同样使用LR和k-ST进行处理，在心内注射3小时后，对雏鸡进行安乐死，取回肠和盲肠样本，进行肠道通透性测试，在实验的第0天和第7天，分别记录了雏鸡的体重。
回肠和盲肠样本使用10%福尔马林固定在嵌入石蜡的磷酸盐缓冲盐水中，然后进行汉森苏木精和伊红染色，制备4 μm厚的切片，利用NIS-Elements软件对光学显微镜图像进行分析，测量回肠和盲肠的绒毛高度和隐窝深度，对每个切片进行五次测量，然后求得平均值。
根据制造商的说明，使用Sepasol RNA I Super G从回肠和盲肠黏膜中提取总RNA，溶解在TE缓冲液中，并在-80°C储存以备使用，使用Nano Drop Lite测量每个样品中的总RNA浓度，通过ReverTra Ace qPCR RT预混液和gDNA去除剂在PTC-100可编程热控制器上进行逆转录。
遵循制造商的说明进行编程，利用Aria MX实时荧光定量PCR系统和Brilliant III超快速SYBR绿色QPCR预混液进行实时荧光定量PCR，PCR程序的循环参数为：95°C变性5秒，然后在58°C、60°C、62°C、63°C或64°C下持续10秒，重复循环50次，熔解步骤的循环参数为：95°C持续30秒，65°C持续30秒，95°C持续30秒。
采用相对定量方法，根据每个靶基因的标准曲线计算RNA表达水平，将每个样品中的相对靶mRNA表达标准化为RPS17管家基因，与对照组中一个标准样品的基因表达平均倍数变化之间的比率。
回肠和盲肠的上皮粘膜被上皮细胞所覆盖，回肠中的绒毛和隐窝在所有实验组中发育良好，但是盲肠的绒毛较短且较宽，且没有明显区分，在LC组中，回肠的绒毛高度显著高于CC组，然而，各实验组之间的回肠隐窝深度没有显著差异，CS组中，盲肠绒毛高度和隐窝深度之和低于CC组。
与CC和LC组相比，经k-ST刺激的组显示Cecal TLR2-1的表达显著降低，CS组中，回肠和盲肠的TLR21表达显著低于CC组，但是LS组和LC组之间没有差异，LC组中，回肠的TLR21表达显著低于CC组，然而，各实验组之间回肠中TLR2-1的表达以及回肠和盲肠中的TLR4表达均没有统计学上的显著差异。
LS组中，Cecal IL-1β的表达显著高于CS组和LC组，LS组中，Cecal TNFSF15的表达显著高于CS组，然而，在回肠中，以及回肠和盲肠中的CXCLi2表达，在所有实验组中均未观察到差异。
在所有实验组中，回肠或盲肠中的AvBD2和AvBD7表达没有观察到差异。
在所有实验组中，回肠内FITC浓度没有显著差异；然而，LS组中盲肠内FITC浓度显著低于CS组和LC组。
结论：
研究结果表明，罗伊氏乳杆菌可能调节肉鸡肠道粘膜中的免疫因子表达，可能观察到免疫球蛋白的表达水平、炎症因子的分泌等免疫相关因子的变化，这表明罗伊氏乳杆菌可能通过调节免疫反应来增强肠道粘膜屏障功能，这一结果有助于深入了解罗伊氏乳杆菌在肉鸡肠道屏障功能增强中的作用机制。
参考文献：
贾扎尔·拉纳，《炎症性肠病结肠粘膜中转化生长因子α和β的表达》
索斯雷·希尔德伦，《抗菌先天免疫中的细胞团队合作》
杰尔祖泽尔，《细胞与组织研究》
