非洲猪瘟病毒在传统的丛林传播循环、蜱-猪循环和家猪(猪-猪)循环内持续存在。目前，我国仍主要关注家猪循环传播，尽管对非洲猪瘟病毒的传统传播途径和发病机制越来越了解，但是持续不断的疫情爆发表明，非洲猪瘟的一些其它传播途径亟需更透彻的研究。

近期，由德国和美国学者组成的团队，对非传统传播途径进行了探索，用实验证实了非洲猪瘟病毒可以通过猪精液的人工授精进行高效传播。冠牧精准诊断学习后对内容进行了整理，希望能为广大养殖朋友提供帮助。

该研究团队选择基因Ⅱ型非洲猪瘟减毒毒株(爱沙尼亚 2014)通过肌肉注射方式对4头公猪进行毒株接种感染，随后从已受感染公猪中采集精液，并将其混合稀释后通过人工授精给14头后备母猪。

一、公猪接种毒株后，不同基质样本的非洲猪瘟病毒检测情况

4头试验公猪在-7、-3、-2、-1、0、1、2、3、4、5、14、20 dpi时采集了精液、血液、口腔液和直肠粪便拭子样本。对上述类型样本进行qPCR检测，小编汇总如下：

数据表明，在非侵入性采样方式中，口腔液依然是较好的样本类型。

二、公猪和后备母猪不同临床样本的非洲猪瘟病毒检测情况

该研究团队评估了ASFV在受感染公猪和后备母猪的体内传播情况，在4头试验公猪和14头试验后备母猪到达临床症状终点安乐死后，采集了血液、扁桃体、下颌淋巴结、肺、肾、脾脏、肝脏、胃肝淋巴结、腹股沟淋巴结、腘淋巴结和粪便样本，进行qPCR检测，在所有被检测临床样本中均检出ASFV阳性。

同时也评估了ASFV在生殖器官不同组织中的分布，检测了公猪生殖器官（*丸睾**、附睾、前列腺、精囊、尿道球腺）和母猪生殖器官（前庭、阴道、宫颈、子宫、输卵管、卵巢）样本，所有被检测临床样本中均检出ASFV阳性。

图1 猪11种临床样本和6种生殖器官非洲猪瘟病毒qPCR检测结果

三、胚胎和胎儿样本的非洲猪瘟病毒检测情况

14头后备母猪经人工授精后，12头怀孕母猪在出现非瘟临床症状时发生流产或吸收，将样本分为三组（流产胚胎、健康胚胎/胎儿、异常胚胎/胎儿）进行去PCR检出，其中健康胚胎/胎儿的qPCR结果为阴性，其它胚胎/胎儿均为阳性，说明通过人工授精能将ASFV传播给母猪和胎儿。

图2胚胎和胎儿样本非洲猪瘟病毒qPCR检测结果

注：根据形态将样本分为3组，从左到右依次为流产胚胎、健康胚胎/胎儿、异常胚胎/胎儿，“•”符号表示一个样本。

四、生殖系统组织、精液和脾脏感染性病毒的测定

为评估ASFV感染对公猪和母猪的生殖系统的影响，是否存在感染性病毒粒子，该研究团队对生殖系统组织匀浆样本进行了红细胞吸附试验（HAT）。

精液匀浆HAT检测结果与其qPCR检测结果一致，2dpi时开始HAT阳性，到4-5dpi时所有公猪呈HAT阳性。所有母猪在阴道、宫颈、子宫、输卵管匀浆样本表现不同程度的阳性。

不同样本HAT检测结果

注：“-”=阴性，“•”=弱阳性，“••”=阳性，“•••”=强阳性，灰色区域=无样本。

冠牧观点

1、 通过口腔液采样进行监测依然是早期发现病毒比较好的非侵入性采样方式，但其病毒载量较血液样本更低，对于荧光PCR仪器、检测试剂盒、核酸提取试剂盒敏感性提出了更高的要求。

2、 精液样本检出阳性的Cq值均较高，为防止漏检，需要更高灵敏度的PCR检测试剂盒来避免带毒猪精扩散病毒，精液病原常态化检测是防止疫病再次蔓延流行的最佳策略。

3、 猪精液样本含有大量糖、蛋白、酶等，导致内源基因和病毒核酸提取效率低，冠牧精准诊断研制的猪精液裂解液可化繁为简、快速、可靠、稳定的对猪精液样本进行前处理，提高病毒核酸提取效率和纯度。

4、 公猪感染ASFV后，不会影响到精液中的红细胞、精子的运动能力、畸形率以及精子数等常规检查结果，故需检测精液中是否带有ASFV还需进行病原检测。

5、 在本研究中，试验公猪共4头（2头大白、2头皮特兰），大白分别在接种毒株后第10、11天死亡，皮特兰在第17、25天死亡，提示不同品种的猪对ASFV的耐受能力不一致；

6、 在共计18头试验动物中，导致动物死亡的因素除了ASFV引起的器官衰竭等，还有部分是因为继发的细菌感染，因此在非瘟防控中，控制其他疾病也至关重要。

公司简介：

冠牧精准诊断（湖南冠牧生物科技有限公司）聚焦于动物体外诊断试剂和设备领域，提供精准的动物疫病诊断试剂和设备，公司开发了猪病、禽病、反刍动物、水生动物荧光PCR试剂和抗体检测试剂，搭配配套的荧光定量PCR仪、核酸自动提取仪、酶标仪等设备，能够精准的诊断动物传染病，指导疫病防控。