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就营养价值而言，鸡血可能不太适合白蛉发育，因为它的血细胞比容值低于其他家畜的血细胞比容值，因此，为了从禽血粉中获得相同体积的红细胞，昆虫需要通过预利尿来补偿和浓缩鸡血粉。

然而，虽然在白蛉属物种中观察到了利尿作用，据报道在卢种中不存在这种现象，在白蛉消化生理学方面，禽类血液也可能与哺乳动物血液不同，因为前者的红细胞是有核的，特别是尿酸盐排泄可能会受到影响，尿酸盐是 DNA 和蛋白质分解代谢的主要产物，也是昆虫的重要抗氧化剂。

这项研究的目的是探讨鸡作为卢的血粉来源的作用，并测试鸡血是否对白蛉内利什曼原虫寄生虫的发育有害。

蛋白质测定

不同类型的血液和喂血Lu 的中肠中的蛋白质总量，longipis根据 Bradford进行定量，并适用于96孔板测定，简而言之，将在 0.1 M Tris-HCl pH 7.5 中制备的 4 μL 血液或肠道匀浆与 196 μL BIORAD ®蛋白质测定试剂混合，在蒸馏水中稀释 1 倍，并在 96 孔板中在 595 nm 处测量吸光度，使用牛血清白蛋白作为标准品。

白蛉中肠匀浆的血红蛋白测定

血红蛋白基本上如前所述通过比色法测定，喂血 4 小时后，解剖用鸡、兔、人和狗的血液喂养的白蛉个体中肠，并转移至含有 100 μL 0.15 mM NaCl 的 1.5 mL Eppendorf 微量离心管中，使用电动迷你杵匀浆并快速离心去除大碎片后，将 20 μL 体积的白蛉中肠匀浆与 200 μL Drabkin 试剂在黑暗中混合 30 分钟。

接下来，将 200 μL 样品转移至 96 孔微量滴定板并在 540 nm 下进行测定，使用人血红蛋白为标准。

观察利尿作用

个体3～5日龄雌性鲁，长须鸟被允许接触两名人类志愿者的前臂，并被允许进行正常的吸血行为：短距离跳跃飞行和寻找合适的进食地点，一旦开始喂食，就在双目立体显微镜下以 40 倍放大倍率连续观察果蝇，3-5 分钟内，腹部因吸血而肿胀，特别注意腹部尖端，注意喂食期间是否出现任何液体滴。

尿酸测定

测量卢全身的尿酸盐，使用 Amplex Red 尿酸测定试剂盒 对长须雌性进行比色测定，用鸡血和兔血喂养昆虫，并在喂血后12、24、48、72和96小时收集完全饱足的昆虫，将白蛉转移至 1.5 mL Eppendorf 管中，并使用电动迷你杵在 130 μL 0.1 M Tris-HCl pH 7.5 中均质化，以 13,500 rpm 离心 15 分钟。

在将 50 μL 匀浆与 50 μL Amplex Red 试剂混合，37°C 孵育 30 分钟后，在 490 nm 处测量吸光度，用于 Lu 排泄物中尿酸盐的测量，长触须苍蝇以鸡血和兔血为食，并单独保存在带有穿孔盖子的微量离心管中，以便通风。

试管要置于密封塑料盒内，盖在湿润滤纸上，将成年雌性和排泄物均质化，并通过用 130 μL 0.1 M Tris-HCl pH 7.5 洗脱收集尿酸盐，由 50 μL 0.1 M Tris-HCl pH 7.5 和 50 μL 白蛉匀浆组成的对照空白也在 490 nm 处读取并从实验结果中减去。

白蛉产卵和幼虫发育

四天大的雌性沙蝇被允许以鸡或人类志愿者为食，鸡在饲喂过程中受到限制，狗则以 1-3 毫克/公斤体重的 2% 赛拉嗪镇静，所有涉及动物的程序均由合格的兽医按照巴西政府法规进行，从口器插入皮肤后开始估计充血时间，饱饱的白蛉在笼子里再保留24小时。

然后转移到单独的石膏内衬（20毫升）产卵盆中，将每只昆虫放在盆中，并提供一块沾有70％糖溶液的棉绒垫，直到其产卵并死亡，死昆虫体内保留的卵数量也被计数并添加到每个个体产下的总数中，将吸血雌性产下的卵转移到衬有石膏的饲养盆中，以便每个饲养盆在同一天产下相同数量的卵，监测以狗血和鸡血喂养的雌性后代的发育，直到最后一只成年白蛉出现，记录每组产生的成虫数量和雄性/雌性比例。

利什曼原虫感染

所有感染工作均使用培养的墨西哥利什曼原虫无鞭毛体，培养无鞭毛体，在培养基中并富含20%胎牛血清。

在感染前五天，收集了大约 600 只新出现的白蛉并分成两组，然后，两组白蛉以每毫升血液接种有 2 × 10 6 L. mexicana培养无鞭毛体的血液为食，进行感染。

通过固定在每个笼子内的膜饲喂系统将充分混合的受感染血液提供给白蛉，其中将鸡皮膜固定在玻璃饲管的末端，然后填充1.5毫升受感染的血液并加热至35°C，一组白蛉用兔全血喂养无鞭毛体，第二组同时用鸡全血喂养无鞭毛体。

然后将每组中完全饱食的雌性移至新鲜的笼子中，感染期间和感染后，将果蝇维持在 24°C 和 90% RH 的环境下，并给予 70% 蔗糖溶液以提高白蛉的存活率，每个实验至少重复两次。

感染后八天内，每 48 小时对每组 10 只完全充血的雌性进行解剖，将肠道在 50 μl 0.15 mM NaCl 中匀浆，并通过使用血细胞计数器计数来确定每只果蝇的寄生虫数量，每 48 小时从每个实验组中随机抽取 5 个额外样本进行差异计数，将 10 μl 中肠匀浆置于载玻片上并进行 Giemsa 染色，以估计不同的形态形式。

白蛉的血液来源和摄入分析

为了研究血粉来源可能对白蛉的营养价值的影响，研究了四种不同类型的血液：狗、人、兔和鸡，对于长触卢兹曼原虫，它们代表人类宿主婴儿利什曼原虫的储存宿主，兔子作为用于膜喂养的常见实验室血液来源，而鸡作为重要的环境血液来源，测定狗、人、兔和鸡血液中的总蛋白和血红蛋白含量，以及一系列其他血液学参数。

在狗和人的血液中血红蛋白含量均显着高于兔血或鸡血，总蛋白质含量变化较小，在检查的哺乳动物血液来源中相对一致，然而，鸡血的总蛋白含量不到所分析的任何哺乳动物血液的一半，这与低血细胞比容和血浆蛋白浓度一致，尽管存在这些差异，红细胞本身的体积和血红蛋白含量仍符合预期。

沙蝇消化

所描述的数据表明，血粉来源的营养质量的变化可以至少部分地通过利尿作用来补偿，然而，除了细胞含量之外，还有其他因素也可能影响血粉的营养质量。

比较哺乳动物和鸟类血液时最明显的因素之一是后者中存在有核红细胞，鸡血中的DNA含量大约是哺乳动物的30倍，在血粉消化过程中，嘌呤和蛋白质被代谢成尿酸盐，这是昆虫氮代谢的主要终产物，尿酸盐被释放到血淋巴中，并通过pH梯度被马氏小管吸收，构成主要的排泄产物。

研究人员测量并比较了以鸡血或兔血膜喂养的果蝇的尿酸盐产量差异，对整个Lu 进行了分析，长须体和整个身体加上排泄物，试图估计两种类型血液的总体尿酸盐产量，尿酸盐含量在喂血后增加，在24-48小时达到峰值，与兔血相比，饲喂鸡血的果蝇含有更多的尿酸。

然而，当考虑尿酸盐总量时，在所有测量的时间点上，以兔血喂养的沙蝇始终比以鸡血喂养的沙蝇产生更多的尿酸 。

体内较高的尿酸盐浓度可能会延长以血液喂养的果蝇的寿命，因为尿酸盐是血粉来源的氧化应激中血红素产生所产生的自由基的重要清除剂，例如，黑腹果蝇的无尿酸玫瑰色突变体，黄嘌呤脱氢酶（有缺陷，对氧源应激Lu中黄嘌呤脱氢酶的RNAi沉默敏感，长触须不利于生存。

与用兔血喂养的果蝇相比，用鸡喂养的果蝇体内较高的尿酸浓度并没有反映出更长的寿命，据推测这是因为用兔血喂养的果蝇体内产生了足够的尿酸来满足它们的抗氧化需求。

沙蝇以活宿主为食

不同活体宿主的吸血对Lu的摄食行为和繁殖成功率的影响，对长触须进行了调查，苍蝇被允许接近活的限制动物宿主或人类志愿者，并检查各种参数，当提供三种宿主之一时，进食的白蛉的百分比没有显着差异，吃不同宿主所需的时间在不同组内差异很大，然而，人类宿主的平均进食时间最快，这与鸡和狗显着不同。

通过鸡血感染白蛉

Lutzomyia longipalis是医学上重要的寄生虫婴儿乳杆菌的天然载体，家鸡被认为是白蛉媒介的重要维持宿主，并且鸟类所有权已被确定为疾病的关键风险因素，鸡也能抵抗利什曼原虫感染，鸡血对寄生虫在载体中发育和随后传播的确切影响尚不清楚。

通过鸡血和兔血对白蛉感染利什曼原虫的比较表明，鸡血是卢省墨西哥利什曼原虫感染的良好媒介，与感染后 6 天的兔血喂养组相比，饲喂无鞭毛体感染的鸡血粉在白蛉中产生了持续较高的感染百分比，与兔血喂养的白蛉相比。

通过鸡血感染的白蛉中观察到的寄生虫数量有更高的趋势，感染后 6 天，感染鸡血的白蛉中发现的寄生虫数量显着高于感染兔血的白蛉在Lutzomyia migonei中的观察结果一致，通过鸡血感染的白蛉中较高的寄生虫数量特别令人感兴趣，因为寄生虫的数量对于传播潜力很重要。

血型对鲁地墨西哥 L. mexicana 前鞭毛体分化的影响

随着中肠感染的进展，前鞭毛体形态发生变化，导致哺乳动物感染性后循环形式，哺乳动物和鸟类血液中不同形态利什曼原虫种群的相对比例遵循相似的模式，最初的种群主要被确定为前循环前鞭毛体，随后内生单胞菌和细单胞菌种群的比例增加，随后两组中都出现了哺乳动物感染性后循环形式。

通过兔血和鸡血感染的白蛉寄生虫种群在感染后 2 天，与用兔血喂养的白蛉喂养的寄生虫相比，通过鸡血施用的寄生虫具有显着更高的原循环寄生虫数量和更低的内毛虫频率。

6天后与兔血感染的白蛉相比，兔血感染的白蛉具有相对较多的后循环，其内线单胞菌和细单胞菌的频率明显更高，然而，血源对感染后4天不同形态的频率没有显着影响，到第 8 天两组都支持主要的后循环群体。

总体而言，通过鸡血感染可能与发育速度稍慢有关，因为这些果蝇较晚产生后循环体，在感染后第 8 天，两种血液来源的寄生虫以相似的比例发育到哺乳动物感染阶段，结果显示了卢的潜力，longipalpis在鸡血中产生大量哺乳动物感染性后循环前鞭毛体，这与 Schlein 等人的工作形成鲜明对比。

其中白蛉利什曼原虫主要感染受到抑制摄入禽火鸡血液后，通过鸡血建立感染表明鸡的循环血液中没有任何东西可以预防感染，因此鸡由于不同的原因不允许利什曼原虫发展。

通过鸟类和哺乳动物血液来源的感染以类似的方式进行，尽管在我们的实验中达到每种形态形式的峰值所需的时间似乎更长，这很可能是由于与之前的研究相比，这些感染进行时的环境温度较低，为 24°C。

在第 8 天时检测到通过全鸡血和兔血感染的苍蝇中存在类似比例的后循环形式，但这意味着用鸡血喂养的白蛉中的后循环形式绝对数量较多，因为它们的利什曼原虫总数较高人口，不能忽视这可能导致更高传播潜力的可能性。

结语

结论是鸡是支持鲁的合适宿主，longipalpis种群和鸡血可能支持卢省传播性利什曼原虫感染的发展。

该研究为巴西公共卫生当局提供了直接有益的信息，使他们能够加强现有的 VL 控制策略，可能是通过限制已经存在该疾病的地区养鸡，或者通过改进的方法减少残留杀虫剂喷雾的量。

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