目的：探讨育龄期女性HPV E6/E7 mRNA的表达及阴道微生态异常与宫颈病变的关系。
方法：选取2019年12月-2021年8月在蚌埠医学院第一附属医院妇产科门诊及住院部因行宫颈癌筛查就诊的患者，共纳入1245例育龄患者。所有患者均行阴道镜检查，根据阴道镜病理检查结果分为子宫颈上皮内瘤变(CIN)I组290例，CINⅡ组 360例，CINⅢ组465例，子宫颈鳞状细胞癌(CESC) 组130例，另纳入150例健康女性为对照组。通过检测宫颈HPV E6/E7 mRNA 的表达和阴道分泌物病原体，分析其与宫颈疾病的关系。
结果：各组阴道清洁度比较差异有统计学意义(X2= 46.123,P＜0.05)，其中阴道清洁度Ⅲ～Ⅳ检出率对照组＜CINⅠ组＜CINⅡ组＜CINⅢ组＜CESC组; 各组加德纳菌阳性检出率差异有统计学意义(X2= 39.404,P＜0.05) ;各组念珠菌阳性及滴虫阳性检出率差异均无统计学意义(均P>0.05) ;各组HPV E6 /E7 mRNA阳性检出率比较差异有统计学意义(X2= 287.386,P＜0.05)，CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、CESC组、对照组HPV E6/E7 mRNA阳性检出率分别为 50.7%、81.9%、76.1%、79.2%、13.3%; CINⅠ组、CINⅡ组、CINⅢ组、CESC组中HPV E6/E7 mRNA的阳性表达率与阴道微生态失调率相关(均P＜0.05) 。Logistic回归分析显示阴道清洁度Ⅰ~Ⅱ度及乳酸杆菌阳性是HPV E6/E7 mRNA表达的独立保护因素(OR＜1，均P＜0.05)。
结论：HPV E6/E7 mRNA 的表达阳性率增加、阴道清洁度(Ⅲ~Ⅳ) 检出率增加、加德纳菌阳性检出率增加均为预测宫颈癌或宫颈癌前病变的高危因素。
研究背景
90%的宫颈癌(cervical cancer)是由人乳头瘤病毒（human papilloma virus，HPV) 感染，尤其是高危型人乳头瘤病毒( high-risk HPV，HR-HPV) 持续感染导致。大多数妇女在开始第一次性关系后很快就被感染，一般3个月左右传染性最强，在中青年妇女中，90%的人乳头瘤病毒感染可以被自身免疫清除，只有不到10%会发展为持续性感染。宫颈癌发展的另一个主要因素是HPV与人类基因组的整合，这导致HPV 癌蛋白早期编码蛋白E6和E7的持续表达。目前HR-HPV基因型病毒载量和E6/E7 mRNA检测被认为是恶性宫颈病变进展的替代标志物，可分流高危人群,预测宫颈病变的预后。
研究表明，正常的阴道微生态在预防女性生殖道感染中起着不可或缺的作用，其改变与宫颈病变的发展密不可分,阴道微生态主要由其解剖结构、微生态区系、局部免疫和内分泌因素组成。如果阴道微生态菌群失去这种动态平衡，则外来微生物更容易侵入生殖道并引起炎症。炎症刺激物的存在增加了患癌症的风险。根据不同的研究，阴道微生态在预防HPV感染和加速HPV病毒清除方面起着至关重要的作用其体内平衡、失衡可能是HPV感染的协同因素HPV E6/E7 mRNA检测可以反映HPV的持续感染但临床应用不是很广泛，本院2年前率先开展了HPV E6/E7 mRNA检测项目，拥有丰富的临床检测资料本研究通过 HPV E6/E7 mRNA 表达和阴道分泌物病原学检测，旨在分析 HPV E6/E7 mRNA 表达及阴道环境异常与宫颈疾病的关系，为调节阴道微生态平衡、阻断HPV持续感染和干预宫颈病变的进展提供依据。
研究结果
01 各组阴道微生物检出率比较
各组阴道清洁度比较差异有统计学意义( P<0.05)，其中阴道清洁度Ⅲ~Ⅳ检出率对照组<CIN I组<CINⅡ组<CINⅢ组<CESC组；各组加德纳菌阳性检出率差异有统计学意义( P<0.05)；而各组研究对象念珠菌阳性及滴虫阳性检出率差异均无统计学意义(均P>.05)，对照组与各组占比相近；各组乳酸杆菌比较差异有统计学意义(P<0.05)，详见表1。
02 各组HPV E6/E7 mRNA表达情况比较
采用X2检验分析结果显示，各组HPV E6/E7 mRNA阳性率比较，对照组<CIN I组<CINⅢ组<CESC组<CINⅡ组，差异有统计学意义(X2= 287.386,P<0.001)，详见表2。
03 各组 HPV E6/E7 mRNA 的表达与阴道微生态异常的关系
CIN I组、CINⅡ组、CINⅢ组、CESC组中HPV E6/E7 mRNA的阳性表达率与阴道微生态失调率相关(均P<0.05)，详见表3。
04 HPV E6/E7 mRNA 表达影响因素的logistic回归分析
以HPV E6/E7 mRNA的表达是否阳性为因变量(阳性=1，阴性= 0)，所有组别中HPV E6/E7 mRNA表达阳性共919例,阴性 476例，以微生态指标（阴道清洁度、乳酸杆菌、加德纳菌、念珠菌、滴虫) 为自变量进行logistic回归分析。各变量赋值方法如下，阴道清洁度I~Ⅱ度=0，Ⅲ~Ⅳ度= 1; 加德纳菌阴性=0，阳性=1；念珠菌阴性=0，阳性=1；滴虫阴性=0，阳性=1；乳酸杆菌阴性=0，阳性=1。结果显示，阴道清洁度、加德纳菌及乳酸杆菌是 HPV E6/E7 mRNA 表达的影响因素，其中阴道清洁度I~Ⅱ度及乳酸杆菌阳性是HPV E6/E7 mRNA表达的保护因素(OR<1)，加德纳菌感染是HPV E6/E7 mRNA表达的独立危险因素(OR>1)，见表4。
总结
本研究结果显示，不同组别HPV E6/E7 mRNA 的阳性表达率差异有统计学意义(X2= 287.386，P <0.001)，HPV E6/E7 mRNA 阳性率对照组<CIN I组<CINⅢ组<CESC组<CINⅡ 组；CIN I组、CINⅡ组、CINⅢ组、CESC组中HPV E6/E7 mRNA的阳性表达率与阴道微生态失调率相关(均P<0.05)。提示随着宫颈疾病的发展，HPV E6/E7 mRNA阳性的预测意义更大。同时有研究显示HPV E6 /E7 mRNA阳性的患者乳酸杆菌减少、细菌性阴道病的检出率增加，阴道微生态通过促进HPV E6/E7 mRNA 的转录促进宫颈疾病的发生发展。由此可知，随着微生态失衡程度的加重，HPV更易侵袭，致病性增强，诱发宫颈病变的发生和进展。
HPV的持续感染及阴道微生态失衡的双重作用下,宫颈疾病逐步进展，从而发展成宫颈癌。HPV是引起宫颈病变的“种子”，而阴道微生态是“土壤”。土壤的状态决定了种子的“发芽生长”或“死亡消失”。宫颈局部微生态环境在HPV的持续感染和致病、宫颈病变的发生和进展中起重要作用。阴道内乳酸杆菌的减少，或乳酸杆菌功能的抑制，可能导致微生物分泌的酶发生变化，这将导致阴道中的pH值升高，破坏了酸性环境的保护功能，促使有害细菌的繁殖。而有害菌分泌的有害因子会影响阴道细胞的正常功能，降低阴道的免疫功能，从而影响HPV感染的致病性和宫颈病变的发生发展。因此，增加阴道乳酸杆菌含量，治疗其他致病菌感染，调节阴道微生态和局部免疫平衡可能有助于阻断 HPV感染抑制宫颈病变的发生和发展。因此，宫颈局部微生态和HPV E6/E7 mRNA 的检测有助于预测宫颈癌的发生、提供分析指导、评估预后和指导治疗，为临床针对性治疗宫颈病变提供基础研究数据和新思路。
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