农业主推技术：山羊冻精人工授精技术

一、技术概述：

1、技术基本情况。

人工授精技术是通过专业的技术手段将优秀种公羊的精液输入母羊生殖道，使其与卵母细胞完成受精的过程。该技术可以大大提高优秀种公羊的繁殖潜力，同时可以避免传统本交带来的疾病传播问题。而精液冷冻保存技术是人工授精技术发展史的一项重大革命，它解决了精液长期体外保存的问题，使精液使用不受时间、地点和种公羊生命的限制，更大程度地提高了优秀种公羊的利用率。

然而，到目前为止，冻精在山羊生产中的应用仍不普及。目前，冻精制作主要以新鲜蛋黄作为质膜保护剂。但是，蛋黄成分复杂、难以实现标准化，造成不同批次精液冷冻效果差异大，人工授精效果不稳定。此外，不同于牛、绵羊和猪等其他家畜，山羊精浆中含有磷脂酶A，该酶可以和蛋黄发生不利于冻精存活的相互作用。因此，此技术发明了一种成分明确的、不含蛋黄成分的冷冻稀释液，即采用大豆卵磷脂代替蛋黄应用于山羊精液冷冻，并建立了一套山羊冻精标准化制作及人工授精的技术体系。该技术体系解决了山羊精液冷冻效果不稳定、冻精活力低及受胎率低等问题。

2、提质增效情况。

节约了公羊饲养成本，提高了优秀种公羊的繁殖潜力，改善了冻精品质，提高了冻精质量稳定性以及人工授精效果的一致性，提高了母羊的受胎率以及山羊养殖场（户）的经济收益。

二、技术要点：

1. 种公羊符合下列要求。

系谱清楚、遗传稳定、生产性能好，符合特级或一级种羊要求。无遗传性或传染性疾病，体质健康，发育良好。每次射精量在0.75mL以上，精子活力在0.7以上，密度在2.5×109个/mL以上，畸形率低于10%。

2. 假阴道采精。

（1）检查假阴道是否漏气、橡皮内胎是否扭转、松紧是否适度，灌注50℃～55℃热水，竖直假阴道使水至口处即可；

（2）安装气嘴和经消毒处理及生理盐水冲洗过的集精杯，吹气至内胎呈松紧适度的三角形；

（3）取凡士林由外向内涂擦假阴道前1/3处，检查内胎温度为40℃～42℃即可；

（4）采精人员站于公羊右侧，右手握假阴道，食指、中指夹住集精杯，气嘴向内下侧，在公羊上跳母羊时迅速下蹲，将假阴道以斜上45度角靠近发情母羊臀部，用左手引导公羊阴茎至假阴道内，如假阴道温度、压力、润滑度适宜，当公羊的后躯向前冲即完成射精；

（5）当公羊从母羊身上滑下时，将假阴道取下，使集精杯一端向下竖立，打开气卡活塞放气，取下集精杯加盖后送操作室。

3. 精液品质检测。

正常的公羊精液呈乳白色浓厚不透明，普通显微镜下观察精液边缘能见到速度很快的云雾状运动。精子活力采用0～1.0的10级评分标准。在显微镜视野里100％的精子作活跃的直线前进运动评为1.0分，80％作直线前进运动评为0.8分，以此类推。精子密度评定分为“密”、“中”、“稀”、“无”。视野内精子密度很大，精子与精子间的距离小于一个精子的长度为“密”；精子间有明显的空隙，两精子间的距离相当于1～2个精子长度为“中”；在视野中只有少数精子，精子之间超过两个精子的长度为“稀”；若视野里没有精子则记为“无”。

4、精液冷冻。

（1）采集的新鲜精液和同温度的冷冻稀释液（1.0g果糖、2.71gTRIS、1.4g柠檬酸、6-7%甘油和1-2%大豆卵磷脂，用超纯水定容至100ml）按一定比例稀释，最终精子浓度在2×108个/mL左右。将稀释后的精液分装于0.25mL IMV塑料细管，并用封口粉封口。（

2）以0.1℃/min～0.6℃/min速率缓慢降温至5℃，在此温度下平衡2h～4h。

（3）预冻时塑料细管与液氮面的距离应该在4cm，预冻温度为－75℃～－125℃，预冻时间为10min。然后将细管直接投入液氮进行长期保存。

5. 解冻与质评。

将冻精细管从液氮中取出，快速空气浴后置于35℃-40℃水浴解冻30s。解冻后精子总活力不低于60%，前向运动活力不低于40%，顶体完整率不低于50%。

6. 人工授精。

人工授精前将母羊外阴部用0.1%新洁尔灭溶液擦洗消毒，再用生理盐水冲洗干净，然后将用生理盐水温润过的内窥镜慢慢插入母羊阴道，打开电源开关，寻找子宫颈口。输精时，用2mL注射器连接输精枪，先吸取0.5mL空气后吸取0.4mL精液。将输精枪慢慢插入子宫颈口内0.5cm～1.0cm处，缓慢将精液注入。输精完毕使母羊继续倒立并轻拍母羊背部，防止精液倒流出。通常母羊发情后8h～12h第一次输精，间隔10h～12h第二次输精，若还持续发情的，可在第二次输精后8h～12h进行第三次输精。做好公、母羊记录。

三、适宜区域：

本技术适宜在全国山羊饲养区推广。

四、注意事项：

1. 鲜精品质必须达到品质要求；

2. 精液低温平衡、分装、预冻必须在冷室环境（5℃）中操作；

3. 必须确保母羊的饲养管理水平，使其发情症状明显，可以采用公羊试情、内窥镜观察子宫颈或连续测定血液促黄体素浓度的方法确定输精时间。