今天我们将介绍一项特殊的 病理检测技术 ，即 Masson染色 。这种染色方法被广泛应用于观察组织中的纤维化过程，为研究提供了有关组织结构的重要信息。
01简介
Masson三色染色（Masson's Trichrome Stain）是一种组织染色方法 ，通常用于观察和分析组织中的胶原纤维。这种染色方法能够区分胶原纤维、肌纤维和其他细胞结构，因此在病理学、生物医学研究和组织学研究中得到广泛应用。
02实验原理
Masson三色染色 ，亦称 马松染色 ，是结缔组织染色中一项经典的技术，旨在有效显示组织中的纤维结构。该方法利用不同染色剂对组织成分进行区分，使得肌纤维在染色后呈现红色，而胶原纤维则呈现绿色或蓝色。 Masson染色的主要目的在于清晰地区分组织中的胶原纤维与肌纤维。 相较于一般的HE染色，Masson染色提供了更为精细的组织结构显示，特别是在观察病变时，能够更准确地捕捉胶原纤维的变化。这项经典染色技术在病理学研究和组织学分析中具有广泛应用，为研究组织纤维化等方面提供了重要的信息。
03应用简介
1) 器官硬化性疾病的观察： 如肝硬变、心肌瘢痕的观察，胶原染色更易于观察诊断。
2) 瘢痕与淀粉样物质鉴别： 前者胶原纤维染色为阳性，后者为阴性。
3) 骨纤维异常增殖病与骨纤维化的鉴别： 利用胶原纤维染色可较易观察前者胶原纤维紊乱，纵横交错，后者较规则。
04实验所需材料和试剂
1. Weigert氏铁苏木素液
2. 丽春红酸性品红液:
- 丽春红: 0.7克
- 酸性品红: 0.3克
- 冰醋酸: 1毫升
- 蒸馏水: 加至100毫升
3. 1%磷钼酸水溶液:
- 磷钼酸: 1克
- 蒸馏水: 加至100毫升
4. 2%苯胺蓝液:
- 苯胺蓝: 2克
- 冰醋酸: 2毫升
- 蒸馏水: 加至100毫升
5. 亮绿液:
- 亮绿: 1克
- 冰醋酸: 1毫升
- 蒸馏水: 加至100毫升
05组织切片的染色步骤
1. 脱蜡至水：
- 二甲苯Ⅰ：5分钟
- 二甲苯Ⅱ：5分钟
- 二甲苯Ⅲ：5分钟
- 无水乙醇：1分钟
- 95%乙醇：1分钟
- 75%乙醇：1分钟
- 自来水冲洗数秒
2. Weigert铁苏木素染色液染色：
- 使用预先配置的Weigert铁苏木素染色液，染色8分钟
- 流水稍洗
3. 1%盐酸酒精分化：
- 在1%盐酸酒精中分化15秒
- 流水数分钟
4. Masson蓝化液返蓝：
- 使用Masson蓝化液，返蓝15秒
- 流水5分钟
5. 丽春红品红染色液染色：
- 丽春红品红染色液染色5分钟
6. 弱酸工作液洗：
- 使用弱酸工作液洗1分钟（2mL醋酸加1000mL水，下同）
7. 磷钼酸溶液洗：
- 磷钼酸溶液洗2分钟
- 弱酸工作液洗1分钟
8. 苯胺蓝染色液染色：
- 使用苯胺蓝染色液染2分钟
- 弱酸洗1分钟
9. 脱水透明：
- 95%乙醇脱水2次，每次5-10秒
- 无水乙醇脱水2次，每次5-10秒
- 二甲苯透明2次，每次1-2分钟
- 中性树胶封固
06实验流程
07案例展示
08注意事项
1、染色易脱片
① 组织本身破碎或过硬等，用防脱载玻片解决；
② 脱水、透明不足，重新脱水透明浸蜡；
③ 脱水、透明过度，用酒精甘油各半浸泡切面后再切片。
④ 切片过厚，厚薄均匀切片。
2、切片染色不均
① 取材固定不当，取材规范标准，固定彻底；
② 脱水不够，重新脱水、透明、浸蜡。
3、切片染色模糊不清
① 包埋蜡温度过高；
② 分化过度；
③ 脱水透明不彻底。