动物DNA提取实验
方法原理
在浓氯化钠（1-2mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很大，核糖核蛋白的溶解度很小，在稀氯化钠（0.14mol/L）溶液中，脱氧核糖核蛋白的溶解度很小，核糖核蛋白的溶解度很大。因此，可利用不同浓度的氯化钠溶液，将脱氧核糖核蛋白和核糖核蛋白从样品中分别抽提出来。
实验材料：
小白鼠肝脏
试剂、耗材：
NaCl、EDTA-Na、SDS柠檬酸三钠、氯仿―异戊醇混合液、乙醇二苯胺、无水乙醇、过氯酸；匀浆器、离心机、量筒、吸管、水浴锅、真空干燥器
[ 试剂配制]
- 5mol/LNaCl溶液：将 292.3gNaCl 溶于水，稀释至 1000ml 。
- 0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA-Na溶液：溶 8.18g NaCL及 37.2g EDTA-Na于蒸馏水，稀释至 1000ml 。
- 25%SDS溶液：溶 25g 十二烷基硫酸钠于 100ml45% 乙醇。
- 0.015mol/LNaCl- l0.0015mol/L 柠檬酸三钠溶液：氯化钠 0.828g 及柠檬酸三钠 0.341g 溶于蒸馏水，稀释至 1000ml 。
- 氯仿-异戊醇混合液：氯仿：异戊醇= 24：1（V/V）
- 1.5mol/LNaCL-0.15mol/L柠檬酸三钠溶液：氯化钠 82.8g 及柠檬酸三钠 34.1g 溶于蒸馏水，稀释至 1000ml 。
- 3mol/L乙醇钠-0.001mol/LEDTA-Na溶液：称取乙酸钠 408g ，EDTA-Na 0.372g 溶于蒸馏水，稀释至 1000ml 。
- 70% 乙醇， 80% 乙醇， 95% 乙醇，无水乙醇。
- 1mol/L过氯酸溶液：将 10ml 过氯酸 （70%） 用蒸馏水稀释至 110ml 。
操作步骤
- 将 10头小白鼠 迅速杀死，取出肝脏，用 0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA 溶液洗去血浆，剪碎。
- 加入 50ml0.14mol/L-NaCl-0.15mol/LEDTA 溶液，置匀浆器中研磨，待磨成糊状后，将糊状物 离心10分钟（4000r/min） ，弃去上清液。
- 沉淀 用 0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA 溶液洗 2~3次 ，所得沉淀为脱氧核糖核蛋白粗制品。
- 向上述沉淀物加入 0.14mol/LNaCl-0.15mol/LEDTA 溶液，使总体积为 44ml ，然后滴加 25%SDS溶液3ml ，边加边搅拌。
- 置 60水浴保温10分钟 （不停搅拌）溶液变的 粘稠略透明 ，取出冷至室温。
- 加入5 mol/LNaCl10ml ， 使NaCl 最终浓度达到 1mol/L ，搅拌 10分钟 ，加入约 一倍体积 的 氯仿―异戊醇混合溶液 ，振摇 20分钟 ，离心 10分钟（4000r/min）。
- 去掉沉淀， 上层清液 徐徐加入 1.5-2倍95%乙醇 ，DNA沉淀即析出，用玻棒慢慢 搅动 ，则DNA丝状物即缠在玻棒上。
- 将 DNA粗品 置于 27ml0.015mol/LNaCl-0.0015mol/L 柠檬酸三钠溶液中，再加入 3ml1.5mol/LNaCl-0.15mol/L 柠檬酸三钠溶液，搅匀，加入 一倍体积氯仿―异戊醇混合液 ，振摇 10分钟，离心（4000r/min，10分钟） ，倾出上层液体 （沉淀弃去） 。
- 加入 1.5倍体积95%乙醇 ，DNA即沉淀析出。 离心，弃去上清液 ， 沉淀（粗DNA） 按本操作步骤 重复处理 一次。
- 将上步所得 沉淀于27ml0.015mol/LNaCl-0.0015mol/L柠檬酸三钠溶液 中，然后以线状徐徐加入2倍95%乙醇，边加边搅，取出丝状DNA，依次用70%，80%，95%以及无水乙醇各洗一次，真空干燥。
* 60℃水浴是为了使核酸与蛋白质分离。