《GB 4789.35 食品安全国家标准 食品微生物学检验 乳酸菌检验》中，主要涉及了3种乳酸菌，分别为乳杆菌属、双歧杆菌属和嗜热链球菌属。由于3种乳酸菌的培养条件和特征各有不同，要检验出样品中乳酸菌的总数，就需要根据菌种的不同选择使用合适的培养基，对结果进行计数。标准中是这样规定的:
其中：
6.2.3.2 是使用改良MRS培养基倾注，厌氧培养，对双歧杆菌进行计数；
6.2.3.3 是使用MC培养基倾注，需氧培养，对嗜热链球菌进行计数；
6.2.3.4 是使用MRS培养基倾注，厌氧培养，对乳杆菌（或乳杆菌与双歧杆菌）进行计数。
从表中可以看出，在检验乳酸菌数量时，是分了3种情况分别进行规定：
1、单一菌种的情况
（1）只有双歧杆菌时，使用MRS培养基或者双歧杆菌琼脂倾注、培养、计数；
（2）只有乳杆菌时，使用MRS培养基进行培养计数；
（3）只有嗜热链球菌时，使用MC培养基进行培养计数。此处需要说明一下，嗜热链球菌在MRS上也能生长良好（如图1），所以当只有这种单一菌种存在时，日常工作中，如果不需要完全按照国标要求，是否可以使用MRS培养基进行培养计数？
图1 MRS上三种菌的生长情况
综合比较，当只有单一菌种存在的情况下，如果不需要严格按照国标要求来操作，只需要将样品稀释后，取合适浓度用MRS培养基进行倾注计数即可。MRS可以作为通用培养基使用。
2、两种菌的情况
如果样品中有两种菌存在，除了要检验出乳酸菌的总数外，有时还需要对其中各个菌种的数目进行统计。
（1）含有双歧杆菌和乳杆菌时，使用MRS培养基对样品进行倾注后厌氧培养，即可得出两种乳酸菌的总数；而如果还想知道里面所含双歧杆菌的数目，则需要同时用改良MRS进行倾注计数，改良MRS上长出的菌落数，即为双歧杆菌的数目。
（2）含有双歧杆菌和嗜热链球菌时，标准中使用改良MRS和MC进行倾注计数，分别得出双歧杆菌和嗜热链球菌的数目，两者加在一起即为菌落总数。采用改良MRS对双歧杆菌进行计数，这个没有争议，因为在改良MRS琼脂中，只有双歧杆菌能生长，嗜热链球菌不能生长。
在MC琼脂上，虽然在厌氧条件下，嗜热链球菌和双歧杆菌都能生长（如图2），但本标准中要求需氧培养，所以此时MC琼脂上长出的就只有嗜热链球菌了。这个方法是可以达到计数嗜热链球菌的目的的。
图2 厌氧培养条件下MC琼脂上双歧杆菌和嗜热链球菌的生长状态
在日常工作中，如果不严格按照国标要求，我们也可以选择使用MRS琼脂和改良MRS琼脂进行倾注培养，MRS平板上所有菌落之和即为菌落总数，改良MRS平板上的菌数即为双歧杆菌的菌数。
（3）含有乳杆菌和嗜热链球菌时，标准中采用MRS琼脂厌氧培养和MC琼脂需氧培养进行计数，分别得出乳杆菌和嗜热链球菌的数目，两者之和算作乳酸菌的总数。
这一规定的问题在于：因为这两种菌都能在这两种培养基上生长良好，即MRS琼脂上可以长出乳杆菌和嗜热链球菌（嗜热链球菌在MRS培养基上厌氧培养的结果，如图3），MC琼脂上也能长出乳杆菌和嗜热链球菌，只是菌落大小的差异。其中在MRS琼脂上，虽然多数乳杆菌菌落较大，但对于有些乳杆菌（如德氏乳杆菌CICC 6032），菌落直径也很小，跟嗜热链球菌很容易混淆（如图3）。
图3 MRS上德氏乳杆菌和嗜热链球菌的菌落形态
同样，两种菌在MC琼脂上的菌落形态如下图（图4）：
图4 德氏乳杆菌和嗜热链球菌在MC培养基上的菌落形态
所以，要想从同一种培养基上，明显地区分出两种菌来，分别计数，确实也不容易。
问题的关键在于，标准中明确规定，将两种培养基上培养出的菌数，进行相加，即得乳酸菌总数。通过上面的分析，我们不难得出，这样处理，得出的结果实际上是把乳酸菌总数翻倍了，即乳杆菌和嗜热链球菌的数目分别重复了两遍，并且也不能明确得出每种乳酸菌的具体数目。
综合以上三种情况，我们可以总结为，在不需要严格按照标准操作的前提下，如果已知样品中有两种乳酸菌，要检验样品中的乳酸菌总数，只要用MRS进行倾注就可以了，平板上长出的菌数即为乳酸菌总数；而要确切地知道其中某一种菌的数目，则要根据情况进行培养基的选择：使用改良MRS可以很容易得出双歧杆菌的数目，使用MC可以勉强计出嗜热链球菌的数目，但要注意避免其他菌种的干扰；对于乳杆菌的数目，只要用菌落总数减去已经计出的另一种菌的数目即可。
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