临床微生物检验真菌知识点 (真菌荧光检测新项目总结)

编者按:

本次章节新增篇章,为真菌分篇篇章。包含了:真菌相关的知识点。

关键词:医学真菌。

其意义在于概括了真菌概论。

真菌概述

节选《真菌性皮肤病》

上海交通大学医学院

真菌

真菌(fungus):是一类具有细胞壁和典型细胞核结构,缺乏叶绿素,不分根、茎、叶,能进行无性或有性繁殖的真核细胞型微生物。

胞壁不含肽聚糖,故不受青霉素、头孢菌素的影响;胞膜含固醇对二性霉素B、制霉菌素(与固醇结合)、酮康唑(抑制固醇合成)敏感。

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组成:核膜和核仁(细胞核)

完整的细胞器(胞浆)

单细胞(少数)或多细胞(多数)

生存方式:腐生或寄生

繁殖方式:有性或无性

多数对人类有益,少数有害

分布广泛、种类繁多

少数有害:医学(病原)真菌400种,常见的有50~100种。

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目前真菌病呈明显上升趋势:

1.抗生素、抗肿瘤药物、免疫*制剂抑**等的滥用

2.器官移植、介入性治疗等新型技术的开展

3.艾滋病、糖尿病、恶性肿瘤等疾病造成宿主免疫功能低下

真菌分类

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形态:多种多样

有典型的核结构和细胞器

按形态、结构分为两类:

单细胞真菌

多细胞真菌

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单细胞真菌

圆形或椭圆形

包括:酵母型真菌:无菌丝,母细胞以芽生方式繁殖,菌落与细菌的菌落相似。

类酵母型真菌:母细胞以芽生方式繁殖,出芽产生的芽生孢子持续延长,但不断裂、不与母细胞脱离,产生相互连接成藕节状较长的细胞链,可伸入培养基内,称假菌丝 。

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多细胞真菌

基本结构:菌丝和孢子

菌丝(hypha):孢子生出嫩芽,称为芽管管逐渐延长呈丝状,称为菌丝。

孢子(spore):真菌的生殖结构,由生殖菌丝产生。

菌丝体(mycelium):菌丝交织成团。

根据功能不同分为:

营养菌丝(vegetative mycelium)

气生菌丝(aerial mycelium)

生殖菌丝(reproductive mycelium)

根据隔膜的消长分为:

有隔菌丝(大部分病原性丝状菌)

无隔菌丝

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根据形态不同分为:

单纯菌丝

球拍状菌丝

破梳状菌丝

螺旋状菌丝

结节状菌丝

鹿角状菌丝等

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孢 子

生殖结构,由生殖菌丝产生,是鉴定和分类的主要依据。

无性孢子

不经两性细胞配合而产生的孢子。病原性真菌大多数产生无性孢子。

o叶状孢子(thallospore)

芽生孢子(blastospore)

关节孢子(arthrospore)

厚膜孢子(chlamydospore)

o分生孢子 (conidia)

大分生孢子(macroconidia)

小分生孢子(microconidia)

o孢子囊孢子(sporangiospore)

有性孢子

细胞间配合(质配和核配)后产生,绝大多数为非致病性真菌所具有。

o接合孢子

o子囊孢子

o担(子)孢子

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真菌的繁殖与培养

依靠孢子及菌丝进行繁殖

繁殖方式:

无性繁殖——真菌的主要繁殖方式

有性繁殖

无性繁殖主要包括:

芽生 母细胞发芽产生。常见于酵母型和类酵母型真菌。

裂殖 母细胞二分裂产生。如裂殖酵母。

芽管 萌发芽管,伸延形成菌丝。

隔殖 分生孢子梗形成一隔膜,原生质浓缩形成新孢子。

培养特性

培养基:营养要求不高,常用沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)、马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)、察氏培养基(Czapek-Dox Agar)、脑心浸膏琼脂培养基(BHI)

温度:

37℃(酵母型和类酵母型真菌)

25~28℃(丝状真菌)

最适pH:4.0~6.0

生长速度:多数病原性真菌生长缓慢

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菌落

1.酵母型菌落

芽生孢子,无菌丝。如新生隐球菌

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2.类酵母型菌落(酵母样菌落)

呈藕节状细胞链的假菌丝。

如白假丝酵母

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3.丝状型菌落

菌落形态和颜色可作为鉴定、分类的参考依据。见于大多数丝状真菌

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o变异性

形态、结构、及生理性状(毒力)等。

o抵抗力

对热抵抗性不强(孢子60℃经1 h即杀灭)耐受:干燥、紫外线及多种化学药物等敏感:1% ~3%石炭酸、2.5%碘酊及10%甲醛液。

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真菌感染

真菌感染

o原发性感染:

致病性真菌

球孢子菌(coccidiodes)

皮炎芽生菌(blastomyoes dermatitidis)

组织胞浆菌(histoplasma)

马尔尼菲青霉(penicillium marneffei)等

o继发性感染:

机会致病性真菌

机体免疫功能显著下降时发生

真菌性超敏反应

按性质分类:

感染性超敏反应: 感染,Ⅳ型

接触性超敏反应: 吸入或食入,Ⅰ~Ⅳ型

按部位分类:

皮肤超敏反应

呼吸道超敏反应

消化道超敏反应

真菌毒素中毒

o来源:真菌代谢产生毒素,存在于农作物、食物或饲料中

o表现:

1. 肝、肾、神经、造血系统等损伤

2. 致癌(黄曲霉毒素等)

真菌免疫性

o非特异性免疫

1.皮肤粘膜屏障作用

2.正常菌群拮抗作用(白假丝酵母菌)

3.吞噬作用

o特异性免疫

1.细胞免疫

2.体液免疫

真菌实验室检查

实验室检查

1.样本采集:

o浅部:鳞屑、病发或甲屑

o深部:痰、脓、血、尿、便、脑脊液、胸水及分泌物等

o注意:标本应足量、新鲜严格无菌操作资料应齐全

2.形态学检查:

o直接镜检:

标本处理(10%KOH)

涂片染色(革兰染色、墨汁染色)

o分离培养:

含抗生素和放线菌酮的SDA、PDA

酵母型和类酵母型真菌: 37℃,革兰染色

丝状真菌:25℃,乳酸酚棉兰染色

3.血清学检测:

真菌抗原、代谢产物及机体产生的抗体

o抗原:1,3-β-D-葡聚糖(G试验)

甘露聚糖(EIA法或FACE)

半乳甘露聚糖(GM试验)

隐球菌荚膜多糖(乳胶凝聚试验)

o抗体:甘露聚糖抗体(凝胶对流电泳)

烯醇化酶抗体(凝集试验)

马尔尼菲青霉抗体(ELISA法)

o代谢产物:

D-阿拉伯糖醇(酶荧光法)

烯醇化酶(斑点印迹法或DFA)

4.核酸检测:

o核酸G+C mol%测定

oPCR相关技术:巢氏PCR、复合PCR、荧光PCR等

oDNA指纹技术:RFLP、DGGE、SSCP等

o核酸杂交:原位杂交、RDB、基因芯片技术等

oDNA特殊序列分析:ITS、LSU、TEF、线粒体cyt b、COⅠ和COⅡ、b-微管蛋白等基因

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5.抗真菌药物

o皮肤癣菌:

注意清洁卫生,避免接触,局部使用特比萘芬、酮康唑、咪康唑或克霉唑

o深部真菌病:

去除各种诱因,提高抵抗力,常用氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、两性霉素B、5-氟胞嘧啶、卡泊芬净、米卡芬净等

o真菌性食物中毒:严禁食用发霉食品