摘 要
目的：评估术后人群中对比HPV E6/E7 mRNA检测、HPV DNA检测和p16/Ki67免疫细胞化学的诊断性能，以验证HPV E6/E7 mRNA是否可以有效地作为宫颈上皮内瘤变(CIN)治疗成功的指标。方法：回顾性分析2013年1月至2020年9月在阴道镜门诊就诊的197例患者，这些患者的巴氏涂片结果异常提示需要进行阴道镜检查，在一系列的随访包括液基细胞学(LBC)和穿刺活检取样后，患者接受了手术治疗。细胞学和三种HPV相关的分子标志物进行细胞学和分子生物学分析。结果：治疗6个月后，93%妇女的HPV mRNA阳性转为阴性，而只有80.2%的HPV DNA阳性转为阴性。治疗后6-12个月，有6.9%的患者为HPV持续性感染。比较治疗后的细胞学、阴道镜、HPV DNA检测和HPV mRNA检测，发现只有HPV mRNA检测与实际严重程度(治疗期间的组织学)有很强的相关性。(ρ = 0.345, p = 0.006)提示CIN较严重的临床病例治疗失败的几率较高。在预测CIN2+复发病变中HPV mRNA检测有较高的敏感性(100%)、特异性(96.88%)和阳性预测值（45.45%）与HPV DNA检测(分别为80%、82.81%和10.81%)和p16/Ki67细胞双染(分别为80%、95.83%和33.33%)相比，而阴性预测值值相近(96.95% vs 98.59% vs 99.46%)。
结论：与HPV DNA检测和p16/Ki67细胞双染相比，E6/E7 mRNA检测对预测治疗是否成功有较高的诊断价值，可作为CIN治疗状态的预测指标。
研究背景
近年来，宫颈癌的发病率显著升高，主要是基于巴氏细胞学或HPV分子检测技术的应用，尤其是联合检测是30-65岁女性宫颈癌筛查的首选方案。目前宫颈癌被认为是世界上女性癌症死亡的第三大原因。人乳头瘤病毒(HPV)已被认为是宫颈癌的主要病因，尤其是高危HPVs的持续感染与进展到高级病变和宫颈癌密切相关。宫颈癌筛查的主要目的是发现潜在的高级别和/或高级别宫颈上皮内病变通过阴道镜或/和活检确诊并进行后续治疗。
宫颈冷刀锥切（CKC）和环形电切（LEEP）是两种主要的锥切方法，其治疗成功率较高。然而，仍有5%-30%的患者在手术后复发，通常是由于治疗不成功，存在残余病变，需要进行后续治疗。事实上，随着时间的推移，接受宫颈病变治疗的女性患宫颈或其他下生殖道HPV相关疾病的风险更高，因为病毒遗传物质已经整合到宿主基因组中。在CIN治疗后的几年里，宫颈癌发展的风险仍然很高，这意味着需要对这类病例进行强化的长期术后监测。通常结合巴氏试验、HPV DNA检测、阴道镜以及其他参数，包括边缘受累、组织病理学CIN分级、腺体受累、持续性HPV感染、年龄和免疫抑制状态，这些都与CIN残留率和复发率有关，以早期发现宫颈术后残留或复发风险。但目前有研究表明，细胞学、HPV检测、切缘状态等评估会增加假阳性率和主观判断等因素，不利于及时监测宫颈术后残留或复发风险人群的治疗效果。故本研究通过评价E6/E7 HPV mRNA检测、HPV DNA检测和P16/Ki67细胞双染对术后人群的诊断作用，以验证E6/E7 HPV mRNA检测是否能有效地作为宫颈上皮内瘤样病变(CIN)治疗成功的指标。
研究内容
本研究回顾性分析了2013年1月至2020年9月期间就诊于塞萨洛尼基亚里斯亚里士多德大学医学院附属希波克拉提综合医院妇产科二科阴道镜门诊的巴氏涂片结果均为异常的197名女性患者，手术治疗前、后分别进行HPV E6/E7 mRNA检测、HPV DNA检测和p16/ki67检测，评价各指标的诊断性能。
研究结果
1 基本情况
197例宫颈锥切患者，在治疗前，146例(74.1%)确诊为高级别病变(HSIL或ASC-H)， 38例(19.3%)诊断为LSIL, 10例(5.1%)诊断为ASCUS或NILM。3例患者诊断为Ca(1.5%)。术后6个月，大多数女性巴氏试验阴性，近1/4确诊为ASCUS(n=48, 24.4%)，宫颈上皮内病变者20例(10.1%)，LSILs 15例，HSILs 5例。术后病理组织结果阴性为9.1%，CIN1/HPV/LSIL为19.3%，CIN2/CIN3/HSIL为70.1%，SCC为1.5%。
2 HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA、p16/ki67细胞双染检测阳性率比较
治疗前，HPV DNA检测、HPV E6/E7 mRNA检测和p16/ki67细胞双染检测的阳性率分别为（94.9%，80.7%，90.8%）。治疗后HPV E6/E7 mRNA检测和p16/ki67细胞双染检测的阳性率分别为（18.8%，5.6%，6.1%）。见表1。
表1 HPV DNA、HPV E6/E7mRNA、p16/ki67细胞双染检测结果
3 HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA、p16/ki67细胞双染检测性能比较
结合术后6个月的细胞学、阴道镜和组织病理学检查结果，分析HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA、p16/ki67细胞双染检测对术后诊断为CIN2+的性能评价，比较敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值。结果表明HPV mRNA检测有较高的敏感性(100%)、特异性(96.88%)和阳性预测值（45.45%）与HPV DNA检测(分别为80%、82.81%和10.81%)和p16/Ki67细胞双染(分别为80%、95.83%和33.33%)相比，而阴性预测值值相近(96.95% vs 98.59% vs 99.46%)。见表2
表2 HPV DNA、HPV E6/E7 mRNA、p16/ki67检测术后性能比较
4 统计分析
通过斯皮尔曼统计分析，结果显示与实际严重程度(治疗期间的组织学)唯一具有统计学意义的相关性指标为术后mRNA检测(ρ = 0.345, p = 0.006)，这意味着病情越严重，治疗失败的几率越高。
研究结论
研究证实E6/E7在癌症发生中随着HPV DNA整合到宿主基因组中而高表达，因此，HPV mRNA检测是一种病毒活跃转录的指标，因为检测E6/E7 mRNA分子水平的增加，导致遗传不稳定性，并放大恶性转化的风险，因此E6/E7 mRNA可以被认为是疾病进展的一个潜在标志。本研究结果显示与HPV DNA检测和p16/Ki67细胞双染检测相比，E6/E7 mRNA检测具有较高的敏感性、特异性和阳性预测值预测治疗成功与否的能力，E6/E7 mRNA也是与疾病实际严重程度相关性最强的指标，该结果可作为CIN治疗状态的预测指标，可以用于确定术后监测和管理的强度。
参考文献：
Diagnostic performance of HPV E6/E7 mRNA testing towards HPV DNA testing and p16/Ki67 immunostaining as a biomarker of high-risk HPV recurrence in Greek women surgically treated for their cervical lesions[J]. Journal of Obstetrics and Gynaecology Research, 2021.